柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒北京厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒北京厂家
产地：国产|进口
编号：BTN130970
英文名：Gram positive bacteria RNA Column extraction kit
规格：50次
品牌：百奥莱博

柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒北京厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·柱式细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80103
英文名称：Bacterial RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是细菌RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了最费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需 0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
5. 12000～15000g室温离心 3～5分钟。
6. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下 100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9.室温 12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
11.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我们的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有残留 RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


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·Western印迹膜封膜液(NC膜和PVDF膜)
编号：BTN81210
英文名称：Western Blot Blocking Buffer
规格：250mL
Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。无蛋白封闭液可最大限度减少交叉反应引起的非特异性背景。本产品可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·RNA电泳液，10×
编号：BTN3150
英文名称：10×RNAep Buffer
规格：250mL
本品是预配的10×RNA专用电泳液，专门用于RNA甲醛变性胶电泳分析，产品成分为10×MOPS溶液。其特点是即开即用，用户不需要自己进行RNase灭活、高压灭菌、pH调节等操作。与Northern杂交等后续反应兼容。

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

·二*异香豆素溶液(10mg/mL)
编号：BTN130540
英文名称：Dichloroisocoumarin Solution
规格：5mL
本产品为10mg/mL的DMF溶液，工作浓度为1-43μg/mL。二*异香豆素(3,4-Dichloro-2-benzopyran-1-one；3,4-DCI)，分子量是215.0，溶于DMF。它可以抑制大部分丝*酸蛋白，如，弹性蛋白酶，组织蛋白酶G,胞内蛋白酶Glu-C等，不能抑制木瓜蛋白酶、β-内酰胺酶和白*酸*基肽酶。



储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期三个月。


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·5M异硫*酸胍溶液
编号：BTN100902
规格：250mL

·Tricine-SDS PAGE阳极电泳液(干粉)
编号：BTN81214
英文名称：Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer
规格：10L
本产品为干粉型Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液，加水配制后即可直接使用，非常方便。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

·DNA去磷酸化试剂盒
编号：BTN130828
英文名称：DNA Dephosphorylation Kit
规格：20次
分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5´端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5´端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。

产品特点：
1.基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5´端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。

试剂盒组成

成分	规格
10×去磷酸缓冲液	100μl
细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL)	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL)：

成分	用量
DNA片段	不超过10pmol
10×去磷酸缓冲液	5μl
细菌碱性磷酸酶	2.5μl
超纯水到	50μl

2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。
3、酚*仿抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(见附)。

附：酚/*仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/*仿/异戊醇25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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