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常温运输和保存
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一年
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433
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Ficoll-Paque介质打折促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货Ficoll-Paque介质打折促销
编号:BTN131136
品牌:百奥莱博
规格:100mL
本产品含Ficoll PM400、EDTA等成分,它化学惰性,其密度和浓度经过优化,专门用于从外周血中分离淋巴细胞的密度梯度离心介质,同时能保持B和T淋巴细胞的活性和完整性。内毒素含量低于0.2EU/mL。所得淋巴细胞可以用于DNA提取、RNA提取和其他体外实验。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
我公司的北京现货Ficoll-Paque介质打折促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·即用型易错PCR试剂盒
编号:BTN101005
英文名称:Instant Error-Prone PCR Kit
规格:100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性,在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。
产品特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在PCR引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR,只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物,对于1kb以上的产物,建议分段扩增。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
| 易错PCR Mix,10× | 300μl |
| 易错PCR专用dNTP,10× | 300μl |
| MnCl2,5mM | 300μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期为一年。
使用方法:
1.以30μL的标准PCR反应体系为例,如果反应体系不是30μL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中,加入下列成分:
| 易错PCR Mix,10× | 3μl |
| 易错PCR 专用dNTP,10× | 3μl |
| MnCl2,5mM | 3μl |
| 自备DNA模板(10ng/μL) | 1μl |
| PCR引物(自备,10μm each) | 10pmol each |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 1-5U |
| 补水到 | 30μl |
2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件,一般可以先尝试下面的PCR条件:
| PCR前变性 | 94℃ 3分钟 | |
| 易错PCR | 94℃ 1分钟 | 循环30次(见注) |
| 45℃ 1分钟 | ||
| 72℃ 1分钟 |
注:易错PCR一般不需要热启动,也不需要在PCR结束后做延伸处理。
循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率,进而决定每个PCR产物可能得突变位点数,所以所需循环数由客户根据需要改动。
| PCR循环数 | 每个碱基突变几率 | PCR终产物中的突变位点数 | ||||
| 100bp | 200bp | 400bp | 800bp | 1600bp | ||
| 5 | 0.0033 | 0.00 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 |
| 10 | 0.0066 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 |
| 20 | 0.013 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 | 21 |
| 30 | 0.020 | 2.0 | 4.0 | 7.9 | 16 | 32 |
| 50 | 0.033 | 3.3 | 6.6 | 13 | 26 | 53 |
3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
疑难解答:
Q:易错PCR与定点突变PCR有什么区别?
A:定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变,它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外),但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q:易错PCR的错误率是多少?
A:易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%),对500bp的PCR产物,相当于有4%的PCR片段为野生型,12%的含一个突变,20%的含两个突变,22%的含三个突变,18%的含四个突变,12%的含五个突变,12%的含六个或更多突变。
Q:如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率,如何办?
A:可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板,否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板,但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。
北京现货Ficoll-Paque介质打折促销关键词:百奥莱博,Ficoll-Paque介质,BTN131136
联甲* 2"-Nitroacetanilide 103-29-7
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001012 狗血清
北京现货Ficoll-Paque介质打折促销关键词:百奥莱博,Ficoll-Paque介质,BTN131136
·即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子,无MCS)
编号:BTN120515
英文名称:Instant Blue-White Vector T,Type E
规格:20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段,其两个末端的5´都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点:
1. 由于是通过酶切制备,所以载体两端的带T率为100%,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
3. 来源于pUC19 ,无RNA聚合酶启动子,插入位点两侧无多克隆位点。
4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
5. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
6.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。
产品组成:
| 组分 | 规格 |
| 即用型蓝白T载体E型(10ng/μL) | 60μl |
| 阳性对照(35ng/μl) | 30μl |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。
质粒图谱
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