北京现货包涵体大量纯化试剂盒供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货包涵体大量纯化试剂盒供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货包涵体大量纯化试剂盒供应
英文名：Inclusion Body Maxiprep Kit
编号：BTN90510
品牌：百奥莱博
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。

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·终点显色法内毒素定量试剂盒
编号：BTN120415
英文名称：Chromogenic End-point TAL Kit
规格：32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎(TAL)的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子等跟凝血有关成分，当细菌内毒素激活C因子时会，起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基*(代"*")胺(pNA，λmax=405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以通过测定样品405nm的光吸收来用外标准法定量样品的内毒素浓度。其原理图如下(TAL和图中LAL相同)：

本试剂盒就是基于上述原理开发而成，并进行了重大改进，增加了偶氮化试剂染色硝基*(代"*")胺(pNA)的步骤，此步使得反应的最终颜色变成玫瑰红色(λmax = 545nm)，避免了深颜色样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰，结果更加准确可靠。

产品特点：
1.一站式，提供所需的试剂、内毒素对照和无热源的耗材，为用户省去繁琐的准备工作。
2. 灵敏度高，可以对浓度在0.1EU/mL-1EU/mL和在0.01EU/mL -0.1EU/mL两个浓度范围的内毒素样品进行定量。
3. 比经典的pNA法多一步偶氮化染色的步骤，处理样品的范围更广，结果更加稳定可靠。
4.样品中如含有β－葡聚糖，则需选用特异性显色基质鲎试剂盒，因为β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素检测。
5. 若样品含头孢类抗菌素或磺胺制剂，则需要选用不含偶氮化试剂的鲎试剂盒，因为上述成分也能跟本试剂盒中的偶氮染色剂发生偶联反应而干扰偶氮化显色。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌内毒素标准品 15EU	2支
鲎试剂	2支×1.7mL
显色基质	2支×1.7mL
偶氮化试剂1	2支×10mL
偶氮化试剂2	2支×10mL
偶氮化试剂3	2支×10mL
HCl(反应终止剂)	50ml
细菌内毒素检查用水	50ml×2瓶
除热原试管，10×75mm	10×5支
除热原吸头，1ml	10×4支
除热原吸头，0.2ml	10×5支
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期两年。

使用方法：

一、样品的预处理
1.若样品的本底在545nm的吸光度值大于0.5，必须对样品进行稀释后再检测。
2.若样品颜色较深(例如溶血)，或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置样品空白管以扣除样品自身的颜色本底。样品空白管不加入鲎试剂，以等体积的细菌内毒素检查用水代替。其余操作同样品管。
3.本检测方法高度灵敏，故接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。实验过程应防止细菌的污染(内毒素即细菌的LPS)。
4.待测样品的pH值应在6.0–8.0之间，若超出此范围，需用自备的除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。

二、试剂准备
5.细菌内毒素标准溶液配制(制备标准曲线用)：取细菌内毒素标准品1支，按细菌内毒素标准品使用说明(见附2)稀释为10EU/mL的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液，最后按下表以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液，在A-D四个离心管中稀释成0.1、0.25、0.5、1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。注意：也可以选择0.01、0.025、0.05、0.1EU/mL的浓度梯度。注意：标准品浓度范围不同，后续显色实验的保温时间也不同。

成份	A管	B管	C管	D管
细菌内毒素检查用水(mL)	0	0.5	0.75	0.9
1EU/ml内毒素溶液(mL)	1	0.5	0.25	0.1
内毒素浓度(EU/mL)	1	0.5	0.25	0.1

6.阴性对照用细菌内毒素检查用水。
7.配制鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等试剂的工作液。
(1)鲎试剂：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解，得鲎试剂工作液。注意不要用旋涡混匀剧烈振摇。鲎试剂工作液应在10分钟内用完。
(2)显色基质：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻振摇使显色基质完全溶解，得显色基质工作液。显色基质工作液可在无污染的条件下于4℃贮存8小时以内。
(3)偶氮化试剂1：按标签标示量加反应终止剂(注意：不是细菌内毒素检查用水)于偶氮化试剂1瓶中，得偶氮化试剂1工作液。
(4)偶氮化试剂2：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2瓶中，得偶氮化试剂2工作液。
(5)偶氮化试剂3：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3瓶中，得偶氮化试剂3工作液。偶氮化试剂工作液可于4℃贮存1周。

三、实验操作
8.取本试剂盒提供的无热原试管6管，按下表操作(每加一个试剂均需要充分混匀，或用移液器轻柔吹打混匀):NC为阴性对照，PC为阳性对照。

成份	NC 1管	PC 4管	样品 1管
细菌内毒素检查用水(μL)	100	-	-
内毒素标准溶液(μL)(4种)	-	每种分别100	-
待测样品(μL)	-	-	100
鲎试剂工作液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T1分钟
显色基质溶液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T2分钟
偶氮化试剂1工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂2工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂3工作液(μL)	500	500	500
混匀,静置5分钟，于λ545nm测OD值

特别注意：每个批次的T1和T2不同。对本批次。

四、数据处理
9.建标准曲线：Y=bX + a，其中Y为545nm处吸光值，X为内毒素浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。
10.当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：
(1)标准曲线的相关系数r≥0.980，
(2)标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值，
(3)待测样品平行管的平均值在标准曲线的区间内。

附1：待测样品的干扰实验
当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时，须进行干扰实验。待测样品的干扰实验详见《中华人民共和国药典》2010细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰实验”。当鲎试剂、待测样品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须进行干扰实验，步骤如下:
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm)，作为待测样品干扰实验中添加的内毒素浓度，配制含λm内毒素的待测样品阳性对照，测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs；
2.测量出未添加外源内毒素的待测样品溶液内毒素浓度,称为Ct；
3.计算该实验条件下的回收率R＝(Cs–Ct)/λm×100%
4.当R在50%～200%之间，则认为在此实验条件下待测样品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%～200%之外，需对待测样品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效 稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%～200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。

附2：细菌内毒素标准品使用说明
本品为白色疏松海绵状固体，系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品，供鲎实验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和各种阳性对照。其用法如下：
6.溶解：加入适量的细菌内毒素检查用水(BET水，最大加入量不得超过1mL),复溶后置涡旋混匀器上混匀15 min。
7.稀释：将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成各个不同浓度。每次稀释后必须在涡旋混匀器上混匀至少一分钟。每一步的稀释倍数均不得超过10倍。
8.本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测，禁止用于注射、口服等。
9.实验所用的器皿需经过处理，以除去可能存在的外源性内毒素，可以经250℃干烤至少60分钟处理，也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
10.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。


北京现货包涵体大量纯化试剂盒供应关键词：BTN90510,Inclusion Body Maxiprep Kit,包涵体大量纯化试剂盒

DNA Marker Ⅳ(500～7000bp) 
BTN60910 非冻型血液DNA保存液 Blood DNALOCKER
F030626 FITC标记兔抗大鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Rat IgG*FITC
ARB13450 鸡白介素9(IL-9)Elisa分析 Chicken interleukin 9,IL-9 ELISA KIT
DR0201 PCR产物纯化回收试剂盒
ARB11121 人肺炎支原体IGM(MP)检测服务 
磷酸*喹 Formamidinium acetate 50-63-5
BTN111007 MALDI蛋白样品处理试剂盒 MS Sample Preparation Kit
ARB12743 小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa检测说明书 Mouse collagen type Ⅳ,col Ⅳ ELISA KIT
TRNzol总RNA提取试剂 
37348-90-4 两性电解质3-10
9006-59-1 卵清蛋白 Albumin Egg
004000 牛血清白蛋白
ARB13205 小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)尿液中含量检测 Mouse brain derived neurotrophic facor,bdnf ELISA KIT
血清封闭剂   50ml
EP101 PfuDNA Polymerase
L-丙-谷二肽 Erythritol 39537-23-0
赤藓糖醇 Bind-Silane 149-32-6
无水三*化钌 2,4-Dinitrobenzoic acid 10049-08-8
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·多点突变试剂盒
编号：BTN130823
英文名称：Multipoints Mutagenesis Kit
规格：20次
本试剂盒是利用一对设计特殊的锚定引物及几条定点突变引物对DNA多个不同位点同时进行定点突变的试剂盒。锚定引物“尾巴”上的特异性序列是与大多数基因都不相匹配的，因此保证了PCR扩增的特异性。本试剂盒的主要原理是：设计合成同一方向的锚定引物及定点突变引物，将锚定引物及定点突变引物用T4聚核苷酸激酶磷酸化后与模板质粒DNA进行退火，再使用T4 DNA聚合酶和T4 DNA连接酶进行延伸和连接形成突变单链，然后使用锚定引物“尾巴”上的特异性引物(ETail F/ETail R)和高保真DNA聚合酶对突变单链进行PCR扩增，再将获得的双链PCR产物克隆回原载体中，即可达到实验目的，获得目的突变体。原理如下图：


本试剂盒操作快速简单，只需一天时间便可以完成整个突变操作。本试剂盒尤其适用于插入片段长度在1.0 kb以下的多位点基因突变实验，对于1.0 kb以上的DNA片段的多位点基因突变，由于引物退火的不完全、PCR扩增中可能引入新的突变点等原因，可能降低实验成功率。本公司曾经使用本试剂盒，成功进行了1.5kb DNA片段的多位点基因突变实验。本试剂盒中的Anchor F1和Anchor R1引物可供克隆于pUC系列载体或pBluescript系列载体中的DNA片段的多位点基因突变实验，使用方便。使用试剂盒中的Control质粒及各种Control实验用引物可进行Control实验。
 

成份	规格
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl)	40μl
10×Reaction Buffer*1	40μl
ATP(10mM)	48μl
10×Annealing Buffer	40μl
10×Extension Buffer	60μl
T4 DNA Ligase(60U/μl)	20μl
T4 DNA Polymerase(1U/μl)	20μl
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μl)	10μl
5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+plus)	200μl
dNTP Mixture(2.5mM each)	80μl
Control Plasmid(50fmol/μl)	20μl
Control Primer Mix(12.5pmol/μl each)	20μl
Control Anchor F(8pmol/μl)	5μl
Anchor F1(8pmol/μl)*2	20μl
Anchor R1(8pmol/μl)*2	25μl
ETail F(10pmol/μl)	25μl
ETail R(10pmol/μl)	25μl
Ligation Solution I	100μl
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京现货包涵体大量纯化试剂盒供应。