DNA marker(pBR322/BstN I) 核酸电泳

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应DNA marker(pBR322/BstN I) 核酸电泳和回收，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：DNA marker(pBR322/BstN I) 核酸电泳和回收
规格：50次
编号：BTN90602G
英文名：DNA ladder(pBR322/BstN I)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
 本系列产品为传统的酶切分子量标准，由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后，加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知，每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。
 每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5uL。

使用效果：


疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。

更多有关DNA marker(pBR322/BstN I) 核酸电泳和回收的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·柱式粪便DNA提取试剂盒
编号：BTN80102
英文名称：Stool DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是动物粪便DNA提取试剂盒(BTN70601)的柱式升级产品，专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA。

产品特点：
1. 操作更加简单快速，一个样品只需要十多分钟的时间。
2. DNA 更加纯净，OD260/280一般都在1.8以上，得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR扩增。
3. 每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品，能得到5μg左右DNA，片段长度在30 Kb左右。
4.可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取 0.1-0.3 g的粪便，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的粪便震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色随样品而异，上清液的体积一般为300-400μL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管中，上清液颜色将比第4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9 步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10 步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10 步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
12. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μl DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。


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·RNAse-free水
编号：BTN80403
英文名称：RNase-free Water
规格：1mL
本产品就是DEPC处理过的水，但是经过RNase-free质检，所以没有RNase污染。可以用于与RNA相关的实验。

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

·大肠杆菌BL21(DE3)pLysS化学感受态细胞
编号：BTN90507
英文名称：E.coli BL21 (DE3)plysS Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。该菌株带有质粒plysS，具有*霉素抗性，此质粒含有表达T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达。本感受态细胞具有*霉素抗性，适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
菌株基因型为：F- ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pLysS Camr

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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