北京一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)优惠促

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)优惠促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(B)
规格：30次
本产品是在SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得，主要改良的地方有两处：一是配胶液的pH偏酸，二是将还原剂加入到电泳液中。

产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱*反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

 

成分	30T(A)	30T(B)
丙*(代"烯")酰胺(干粉)	60g	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺(干粉)	3g	3g
长效期SDS-PAGE 配胶液，4×	200ml	200ml
长效期SDS-PAGE还原剂	10ml	10ml
TEMED	1.5ml	1.5ml
过硫*(代"酸")铵	1g	1g
长效SDS-PAGE上样液，5×	1ml	1ml
长效期SDS-PAGE电泳液A型	20L	-
长效期SDS-PAGE电泳液B型	-	20L
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：

胶浓度	用量(mL)			总体积 (mL)
	去离子水	30% AB溶液	4×长效期SDS-PAGE配胶液
10%(对A型)	4.20	3.30	2.50	10
12%(对B型)	3.50	4.00	2.50	10

5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
 注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙*(代"醇")容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙*(代"醇")原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，*酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。

二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。

关于北京一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)优惠促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
BL1341 PH计电极保存液
ARB12930 小鼠孕酮受体(PROGR)酶标法分析 Rat progesterone receptor,progr ELISA KIT
D-天冬*酸二甲酯盐*(代"酸")盐 Nitroso R salt 69630-50-8
SDS-PAGE蛋白质低分子量标准 Tyramine
直接胆红素(DBIL)检测试剂盒(钒酸比色法)   50T|100T
ARB13822 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)含量测试 Guinea pig super oxidase dimutase,sod ELISA KIT
ARB13967 猪胰岛素样生长因子-2(IGF-2)尿液中含量检测 Porcine igf-2ELISA KIT
Western及IP细胞裂解液   100ml
BTN3092 *化乙锭清除剂 EB Erasol
蓝色葡聚糖2000 Rosiglitazone maleate 87915-38-6
*甲*(代"酸")* K-Carrageenan Karra Type 582-25-2
BOC-甘*酸 Ferron 4530-20-5
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·核酸内切酶VIII
编号：BTN130642
英文名称：Endonuclease VIII
规格：1000U
大肠杆菌核酸内切酶Ⅷ既有N -糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N -糖基化酶活性可释放双链DNA上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶(AP)位点。AP-裂解酶活性则分别在 AP 位点的3´和5´端切割磷酸二酯键，产生5´磷酸和3´磷酸末端。能被核酸内切酶 Ⅷ 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二*胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲 。尽管核酸内切酶 Ⅷ与核酸内切酶 III的活性相似，但核酸内切酶 Ⅷ 具有β和δ裂解酶活性，而核酸内切酶 III 只有β裂解酶活性。

产品特点：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数，1:10⁴〜1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：75℃ 10分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。

·先锋霉素溶液
编号：BTN120685
英文名称：Cephalotin Solution
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的先锋霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。先锋霉素(7-(2-Thienylacetamido)cephalosporanic acid sodiu*(代"m") salt；Cephalotin sodiu*(代"m") salt)，分子式：C16H15N2NaO6S2，分子量为：418.42，CAS号：58-71-9，溶于水。头孢菌素类抗生素因有共同的母核——7-*基头孢烷酸而得名，不同种类的头孢菌素所带侧链不同，而侧链是人工接上的，所以头孢菌素是一种半合成抗生素。之所以又叫“先锋”，那是从“头孢”的原文Ceph=.cefo译音而来。

储存条件：常温运输、4℃避光保存、有效期一年。


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·一站式GST标记蛋白质微量纯化套装
编号：BTN111116A
英文名称：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)优惠促销。