一站式MBP标签蛋白纯化套装打折促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式MBP标签蛋白纯化套装打折促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式MBP标签蛋白纯化套装打折促销
品牌：百奥莱博
规格：2mL
编号：BTN130871
产地：国产|进口
MBP(麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为40 kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。由于MBP融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中MBP常作为融合蛋白被广泛应用。本产品就是专门用于分离纯化MBP融合蛋白的试剂盒，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2．提供 2mL直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质。
3．采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	规格
直链淀粉-琼脂糖介质	2ml
1 M Tris-HCl(pH7.4)	25ml
0.1 M EDTA溶液	25ml
2 M NaCl溶液	50ml
蔗糖	20g
PMSF(10mg/mL)	1ml
0.1mM MgCl2溶液	50ml
0.1 M麦芽糖溶液	25ml
层析柱(6mL)	1支
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，PMSF需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据MBP蛋白产量决定，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2．用5倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积，下同)自备去离子水洗柱，共3次。
3．用5倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。结合缓冲液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在结合缓冲液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
2M NaCl溶液	1mL	200mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，将细胞沉淀(约100mg)悬于2mL冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000g离心15分钟收集细胞沉淀后，再次悬于2mL冰冷的细胞洗涤液中。(最好用不加诱导物的菌液做对照样。)细胞洗涤液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞洗涤液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.1mL	10mM
2M NaCl溶液	0.15mL	30mM
自备去离子水	9.75mL	-

5．制备细胞裂解物：
1)如果所用载体不带MBP信号肽序列(如pMAL-c2)
a)超声破碎细胞，功率30 W，保持细胞低温(0℃)，直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。)
b)为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入35μl PMSF(10mg/mL)。
c)4℃下13000-15000g离心30分钟，以去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
2)如果所用载体带MBP信号肽序列(如pMAL-p2)
a)4℃ 5000g离心15分钟收集细胞，沉淀悬于1mL冰冷的现配的细胞裂解液中。细胞裂解液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞裂解液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.3mL	30mM
0.1M EDTA溶液	0.01mL	0.1mM
蔗糖	2g	20%(m/V)
自备去离子水	加水到10mL	-

b)加入25μl PMSF(10mg/mL)，室温搅动15分钟，于4℃ 13000-15000g离心10分钟收集细胞。
c)旋动细胞沉淀，加入2mL冰冷的0.1mM MgCl2溶液，4℃搅动10分钟。
d)休克细胞4℃ 13000-15000g离心10分钟，在上清中加入10mM Tris-HCl(pH7.4)(可将1 M Tris-HCl，pH7.4稀释100倍配制而成)至pH为7.4。
e)上清用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，滤液用100倍体积的10mM Tris-HCl(pH7.4)(配方如上)4℃透析。
f)收集透析后样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
6．将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
7．用10-15倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8．使用5-10倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液(即目的蛋白组分)。麦芽糖洗脱液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在麦芽糖洗脱液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
0.1M麦芽糖溶液	1mL	10mM
自备去离子水	8.7mL	-

9．将纯化得到的样品(包括流出液、洗杂液和洗脱液)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
10．填料介质清洗：依次使用3倍柱体积的结合缓冲液和5倍柱体积的去离子水平衡介质，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。本介质可重复使用。
蛋白酶切割释放靶蛋白(可选步骤，所用试剂需自备)
11．用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1)加入自备的凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入50单位的溶于1mL PBS溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
2)4℃以500 g离心5分钟，上清小心转移到新离心管中。
3)用传统的层析方法或SDS-PAGE电泳分离靶蛋白和蛋白酶。

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一站式MBP标签蛋白纯化套装打折促销关键词：One-Stop MBP-Tagged Protein Miniprep Pack,一站式MBP标签蛋白纯化套装,BTN130871

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·免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)
编号：BTN130957
英文名称：Cell Lysate RT-PCR Mix
规格：100次
本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒，它使用精心优化的细胞裂解液直接裂解培养细胞和痕量组织块，然后直接在细胞裂解液中进行RT，再用cDNA进行PCR或荧光定量PCR。

产品特点：
1. 免RNA提取，从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤约3小时，省略了整个RNA提取过程。
2. 灵敏度不低于常规方法(先提总RNA再进行RT-PCR)，不但可以检测到低拷贝的RNA，还可用于检测miRNA。
3. 整合了去除基因组DNA的步骤，只检测RNA，无需担心基因组DNA的污染。
4. 每次只需要10-10000个培养细胞或含相应细胞数的痕量组织(如LCM样品)，验证过的细胞包括Hela、CHO、293、COS-7等，但不能用于U937细胞系。
5. 两步法RT-PCR，后续使用灵活。得到的cDNA既可用于普通PCR，也可用于基于SYBR的荧光定量PCR，也可用于其他定量PCR(如TaqMan)，非常灵活。
6. 有单管操作和多孔板操作两种模式，前者适用于少量样品，后者适用于平行处理大量样品，适用于高通量筛查。
7. 本产品足够100次50μL体系的RT反应和600次30μL体系的PCR反应。

试剂盒组成：

成份	规格
细胞裂解液成分一	3.8mL
细胞裂解液成分二	300μL
细胞裂解液成分三	100μL
Oligo(dT),0.5ug/uL	50μL
随机引物,0.2ug/uL	50μL
MMLV逆转录酶(含RI)	300μL
PCR MagicMix3.0	9mL
RNase-free 水	10mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

我公司生产供应销*(代"售")的蛋白质研究产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购一站式MBP标签蛋白纯化套装打折促销。