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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
Casein Blocking Solution(PBS)
- 库存:
425
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的北京现货酪蛋白溶液(PBS)优惠用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多酪蛋白溶液(PBS)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货酪蛋白溶液(PBS)优惠
英文名:Casein Blocking Solution(PBS)
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
即用型酪蛋白(1%)用于封闭非特异性位点。
A型:溶于TBS的Hammarsten级酪蛋白,Kathon防腐剂,pH7.4。
B型:溶于PBS的Hammarsten级酪蛋白,Kathon防腐剂,pH7.4。可用于在使用牛奶封闭背景高时作为替代品使用。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
除北京现货酪蛋白溶液(PBS)优惠外,我公司正在打折促销以下产品:
·甲基化PCR试剂盒2.0
编号:BTN130428
英文名称:Methylation-Specific PCR Kit 2.0
规格:150次
亚硫*(代"酸")*盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态,反应还必须在低温进行,常规的修饰试剂盒由于是在液相进行,要在低温下让DNA 不相互复性而保持单链状态非常棘手,所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外,常规方法要切换反应液,有多次沉淀步骤,使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点,本公司开发出了此升级产品。
产品特点:
1.用包埋的样品进行所有操作,免去所有沉淀和纯化步骤,极大简化了操作。
2.免去了DNA提取过程,所需实验材料比常规方法更少,最少几个细胞都可以,极大地节约了宝贵材料,尤其适用于珍稀材料。
3.包埋处理后,DNA在整个操作过程中都处于最适于修饰的单链状态,极大提高了修饰效率。
4.DNA 包埋于包埋块中,切换反应液非常方便,而且DNA 不会丢失,所以最终回收率都在90%以上。
5.适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6.本试剂盒提供的甲基化修饰试剂盒足够制备150多个10μL包埋块(如果用纯化好的DNA)或25个10μL包埋块(如果用悬浮细胞);本试剂盒提供的PCR试剂盒足够180次100μL体系的PCR反应。
试剂盒组成:
成分一:甲基化修饰试剂盒(BTN130301)
| 成分 | 规格 |
| 包埋液 | 1.5ml |
| 分子生物学级石蜡油 | 25ml |
| 包埋块裂解液 | 12.5ml |
| 蛋白酶K溶液(10mg/mL) | 150μl |
| 溶液A | 30ml |
| 溶液B成分一 | 2.3 g×5棕色瓶 |
| 溶液B成分二 | 110mg×5棕色管 |
| TE缓冲液,pH8.0 | 125ml |
| 说明书 | 1份 |
注:包埋液用1.5mL旋盖离心管包装,溶液B成分一用5mL棕色瓶包装,溶液B成分二用1.5mL旋盖棕色管包装。
成分二:即用型PCR 3.0(BTN90805)
| 成分 | 规格 |
| PCR MagicMix 3.0 | 9ml |
| 专用染料 | 360μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,保存期一年。但Proteinase K和即用型PCR Mix3.0 需要低温运输,-20℃保存。
使用方法:
一、准备试剂
1.在装有2.3g溶液B成分一干粉的瓶中加入3.9mL水和0.9mL溶液A,摇晃溶解得到4.8mL溶液B成分一。在装有110mg溶液B成分二干粉的离心管中加入1mL 50℃预热的超纯水,摇晃溶解,得到溶液B成分二。将0.6mL溶液B成分二加入到4.8mL溶液B成分一中,得到5.4mL溶液B,冰上放置待用。未用完的溶液B下次不得再使用。
2.每次实验前,将装有1.5mL 包埋液离心管在沸水浴上放置数分钟直到变成溶液,然后放80℃待用。
二、对微量组织材料(如果材料足够,可先纯化DNA,再按第三方案进行)
1.用常规的胰酶消化法处理动物实体组织或培养细胞,得到浓度不超过60细胞/μL的单细胞PBS 悬液。如果实验材料已经是单细胞悬浮液(如卵细胞),则PBS 洗涤后直接离心沉淀,再重悬在PBS中(浓度不超过60细胞/μL)。注:本试剂盒不含本步所需相关试剂。
2.在一个2mL离心管中加入3μL细胞悬液,再迅速滴加7μL在80℃预热的包埋液。注:不需要吹打混匀以免混合液在抢头里面凝固。
3.加入500μL分子生物学级石蜡油,将离心管在沸冰浴中放置20分钟。
4.将离心管转移到冰上放置30分钟,低温下包埋液和细胞混合液将凝固成10μL的包埋块。
5.加入500μL 包埋块裂解液和5μL Proteinase K溶液,37℃保温过夜。加入的溶液比重都比石蜡油大,将会自动沉降到石蜡油下层,不需离心。
6.吸弃包埋块之外的所有溶液(包括石蜡油),用1mL TE缓冲液室温浸泡包埋块2次,每次15分钟。此步可去除残留包埋块裂解液。
7.酶切包埋块中的DNA:选定不识别PCR靶片段的内切酶(本试剂不提供该相关试剂),再用100μL选定内切酶的1×缓冲室温液浸泡包埋块15分钟,吸弃缓冲液后再加入100μL 选定内切酶的1×缓冲液和50U选定的内切酶,37℃保温2小时。
8.吸弃酶切反应液,再加入500μL 新鲜配制的处理液A(配制方法:100μL溶液A+400μL超纯水)室温放置15分钟,重复此步一次。此时DNA 将呈单链。
9.吸弃处理液A,用1mL新鲜配制的处理液B(配制方法:50μL溶液A+950μL超纯水)室温浸泡包埋块5分钟。
10.吸弃处理液B,加入750μL石蜡油,然后沸水浴20-30秒,使DNA单链彻底彼此分开。
11.奖离心管转移到冰上放置30分钟使包埋块重新凝固。
12.在离心管中加入1mL预冷的溶液B,溶液B将自动沉降到石蜡油下层。继续在冰上放置30分钟。此步用于修饰单链的DNA。
13.将离心管转移到50℃放置3.5小时。
14.吸弃溶液B,用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块2次,每次15分钟。
15.吸弃TE缓冲液,用500μL新鲜配制的处理液C(50μL溶液A+450μL超纯水)常温洗涤包埋块2次,每次15分钟。
16.吸弃处理液C,用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块3次,每次10分钟.
17.吸弃TE缓冲液,所得包埋块可以在4℃保存数月待用,也可以用超纯水洗涤两次(每次15分钟)后直接用做100μL体系甲基化PCR的模板。
三、对纯化好的DNA
18.选用不识别PCR 靶片段的合适内切酶酶切纯化的基因组DNA(本试剂不提供所需试剂),总体积不超过20μL,基因组DNA 不超过700ng。
19.酶切结束后,沸水浴5-10分钟灭活内切酶并变性DNA。
20.冰上放置并短暂离心数秒后,再加入4μL溶液A,50℃保温15分钟。
21.迅速加入50μL在80℃预热的包埋液,用手指快速弹击管底混匀溶液并继续放80℃待用。不要吹打混匀以避免包埋液在移液枪头中凝固。
22.在一个新的、2mL离心管中,加入1mL预冷的溶液B,再加上750mL石蜡油,并将离心管放冰上预冷。
23.迅速取80℃保温的混合液10μL,用在空中滴加的方式加到上步准备的预冷的离心管中,滴加的混合液遇冷将迅速在石蜡油中形成包埋块并自动沉入管底。注意:不要将枪头浸入到预冷的溶液中,否则包埋液将迅速在枪头内凝固。如果包埋块没有沉到管底,可以用枪头将其拨到石蜡层下面的液相中。
24.再重复上步操作,共可以得到7个包埋块(约含100ng DNA)。
25.将离心管(含7个包埋块)继续放冰上30分钟进行修饰。
26.后续操作同第13-17步。
四、甲基化专一性PCR(由于包埋块可能会抑制PCR,所以最好使用100μL体系的PCR进行甲基化检查,如果效果不好,建议使用巢式PCR)
27.在一干净的PCR 管中,加入下列成分(冰上操作):
| 成份 | 样品管 | 对照管 |
| PCR MagicMix 3.0 | 50μl | 50μl |
| DNA包埋块(修饰后DNA) | 1块(约含100ng DNA) | 无 |
| 对照DNA(修饰前DNA) | 无 | 100ng |
| 自备MSP引物F | 25 pmol | 无 |
| 自备MSP引物R | 25 pmol | 无 |
| 自备非甲基化PCR引物F | 无 | 25 pmol |
| 自备非甲基化PCR引物R | 无 | 25 pmol |
| 补水到 | 100μl | 100μl |
28.将混合物混匀,放入PCR仪中进行热启动PCR,结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。
北京现货酪蛋白溶液(PBS)优惠关键词:BTN131105B,酪蛋白溶液,PBS,Casein Blocking Solution(PBS),酪蛋白溶液(PBS)
·植物线粒体总蛋白提取试剂盒
编号:BTN130886
英文名称:Plants mitochondrial total protein extraction kit
规格:50次
·大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞
编号:BTN120520
英文名称:E.coli OrigamiB(DE3) Chemical Competent Cell
规格:10*100μl
本产品是采用大肠杆菌Origami B(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品,转化效率可达107。本感受态细胞具有卡那霉素和四环素抗性。
菌株基因型为:F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10trxB(KanR,TetR)。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
北京现货酪蛋白溶液(PBS)优惠关键词:BTN131105B,酪蛋白溶液,PBS,Casein Blocking Solution(PBS),酪蛋白溶液(PBS)
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文献和实验好的生物素抗人IL-2抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。(TMB空白显色孔除外)。37℃反应60分钟。 6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。 7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入(TMB空白显色孔除外)。37℃反应30分钟。 8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。 9. 按每孔90μι依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液,37℃避光反应8-12分钟(注意:显色时间供参考,因用户实验
蛋白质、多肽碘化标记的差别:由于不同的蛋白质和多肽分子中含有的酪氨酸数目不同,而且其空间结构也不相同,分子中的酪按酸残基有的容易发生碘化反应,有的就不容易碘化,因此同样条件下进行碘化标记,不同蛋白质或多肽对碘的利用率是不相同的。不同蛋白质经碘化标记后生物活性受损的情况也各不相同。例如ACTH、促性腺激素释放激素(GRH)、促黄体激素释放激素(LRH)等多肽,碘化标记后容易丧失激素活性或与受体结合的活性;而AFP及人绒毛膜促性腺激素(HCG)等的碘化标记,则较容易保存良好的免疫化学活性。
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