北京BTN60906型cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒

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名称：北京BTN60906型cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)价格厂家
规格：50次
产地：国产|进口
编号：BTN60906
英文名：1st-Strand cDNA Synthesis Kit
本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

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·藻类RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN120503
英文名称：Algae RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将1-5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入0.5mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入0.2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5-10mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为1mL，则加入3mL溶液C和1mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。


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·Hoechst 33258干粉
编号：BTN130864
英文名称：Fluorescent Dye Hoechst 33258，Powder
规格：10mg
Hoechst 33258是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，其常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

CAS号：23491-45-4
分子式：C25H24N6O•3HCl
分子量：533.88

产品特点：
1．Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
2．Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
3．Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；其和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
4．Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/mL。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/mL。

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

使用举例：
1．用PBS或合适的缓冲液制备10～50 µM Hoechst33258染料。
2．将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中。
3．在37℃培养细胞10～20分钟。
4．用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5．用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

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