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Single Cell RNA Amplification Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销,产品信息:
类别:克隆与表达
英文名:Single Cell RNA Amplification Kit
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
单细胞RNA扩增试剂盒 | BTN130551 | 80次 |
品牌:百奥莱博
规格:80次
英文名:Single Cell RNA Amplification Kit
产地:国产|进口
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA,其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究,整合最新技术,开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒,其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例):
产品特点:
1. 双向,既可用于制备正义的mRNA,也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应,免RNA提取,整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞,包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞,还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化),也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%,RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。
成分 | 规格 |
P1(cDNA一链合成引物) | 360μl |
P2(cDNA 二链合成引物) | 360μl |
P3(T7-cDNA 二链合成引物) | 100μl |
溶液A(4×细胞裂解液) | 100μl |
溶液B(RI) | 10μl |
溶液C(逆转录酶) | 40μl |
溶液D | 10μl |
溶液E | 10μl |
溶液F | 150μl |
溶液G(TdT) | 60μl |
超纯水 | 10μl |
PCR 3.0 | 9ml |
转录预配液,2× | 500μl |
T7 RNA聚合酶 | 50μl |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
强烈建议首次使用本产品前,先预实验,用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释,直到浓度为25pg/μL,然后用0.4μL(即10pg RNA,相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增,一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA,如果需要制备aRNA(cRNA),则需要把P1和P2引物对换,其他成分不需要做任何改动。
一:新鲜准备工作液
见手册左侧各表,据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞,工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制,冰上放置时间不能超过1小时。
二:准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备,此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考,本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等),则可以跳过此步直接进入下步操作):
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织,将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中,400g离心4分钟,弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中,使其终浓度为2-80个细胞/μL,所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞,但这些细胞必须是先分离成独立细胞的,不能是未分离的细胞团。
三:cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照),按下表加入各成分:
成分 | 1-10 号样品管 |
RT工作液(按下表1 配) | 每管加4.0μL,共10管 |
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA | 1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞),10号用0.5μL水代替 |
·70℃水浴90秒,转冰上放置1分,短暂离心 | |
溶液C(试剂盒提供) | 每管加0.5μL,共10管 |
·总反应体系为5μL,37℃水浴90m,70℃水浴10m,冰上放置1分钟,短暂离心 | |
Tailing预处理液(按下表2 配) | 每管加1μL,共10管 |
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m,再80℃ 25m,离心后放冰上1m | |
Tailing工作液(按下表3配) | 每管加6μL,共10管 |
·短暂离心后37℃15分钟,70℃10分钟,放冰上1分钟 | |
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板,共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL,作未PCR对照放-20℃待用。 | |
引物+水混合液(按下表4 配) | 每个PCR管加12μL,共20管 |
PCR Mix 3.0 | 每管加15μL,共20管 |
·按(95℃3分,50℃2分,72℃3分)参数循环1次,冰上放1分 | |
P2 | 每管加1.5μL,共20管 |
自备PCR级石蜡油 | 若PCR 仪无热盖,则每管加50μL |
·(95℃30秒,67℃1分,72℃3分,每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次,4℃放置 |
5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集,20 管汇集后将得10 管(对应于10个样),每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物,故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物,去除残留的引物,50μl 洗脱DNA,产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析,判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。
四:制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得),各取1μl 加到10个PCR 管中,各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配),混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s,64℃ 1m,72℃ 5m18s),再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒,67℃ 1m,72℃ 5m18s,每次循环后将72℃延伸时间增加6秒),PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl),用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物,30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可,否则胶体积太大,回收效率低),360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域),最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物,可直接用于后续体外转录。
五:T7 体外转录:请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。
表1:RT工作液
成分 | 用量 |
超纯水 | 30.8μl |
溶液A | 11μl |
溶液B | 1.1μl |
P1稀 | 1.1μl |
合计 | 44μl |
注:P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到,需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参,但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参,则少加2μL 水。
表2:Tailing预处理液
成分 | 用量 |
超纯水 | 8.8μl |
溶液D | 1.1μl |
溶液E | 1.1μl |
合计 | 11μl |
表3:Tailing工作液
成分 | 用量 |
超纯水 | 42.9μl |
溶液F | 16.5μl |
溶液G | 6.6μl |
合计 | 66μl |
表4:引物+水混合液
成分 | 用量 |
超纯水 | 231μl |
P1 | 33μl |
合计 | 254μl |
表5:PCR Mix
成分 | 用量 |
超纯水 | 132μl |
P1 | 11μl |
P3 | 11μl |
PCR 3 | 165μl |
合计 | 319μl |
北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:BTN130551,Single Cell RNA Amplification Kit,单细胞RNA扩增试剂盒
单细胞RNA扩增试剂盒的纯度及用途:纯度高质含量低,适用于研究和配制标准液; 纯度较高,杂质含量较低,适用于定性和定量分析 重量略低于二级试剂,用途近似二级试剂 化学试剂按纯度由低到高可分为工业纯、实验纯(LR)、化学纯(CP)、分析纯(AR)、优级纯(GR)和超纯等多种规格。
想要了解更多关于北京单细胞RNA扩增试剂盒大量库存促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
编号 | 类别 | 名称 |
BTN130986 | 核酸扩增(PCR) | 即用型热启动PCR试剂盒 |
BTN121104 | 细胞组织染色 | 改良型天狼猩红染色试剂盒 |
BTN100874 | 核酸电泳和回收 | DNA尿素-PAGE上样液 |
BTN60705 | DNA纯化 | 一管式植物DNA提取试剂盒 |
BTN91104B | 探针标记及检测 | Denhardt溶液(非同位素探针) |
BTN100942 | 核酸扩增(PCR) | 单孢子全基因组扩增试剂盒 |
BTN90805 | 核酸扩增(PCR) | 即用型PCR试剂盒(含染料) |
BTN70102C | 蛋白质研究 | 蛋白marker(43~200kD) |
BTN61203 | 核酸扩增(PCR) | PCR级高GC的DNA清除剂 |
BTN100911 | 蛋白质研究 | 长效期SDS-PAGE上样液 |
BTN100833 | 蛋白质研究 | PMSF溶液(10mg/mL) |
BTN100303 | DNA纯化 | 柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法) |
BTN130983 | RNA纯化 | RNase喷雾清除剂 |
BTN60305 | RNA纯化 | 真菌RNA提取试剂盒 |
BTN100813 | 干粉培养基 | SOB培养基 |
BTN160101 | 克隆与表达 | pUCm-T载体 |
BTN130308 | 核酸扩增(PCR) | 一管式双链cDNA合成试剂盒 |
BTN131282 | 其他细胞生物学试剂 | 多聚甲醛-磷酸缓冲固定液 |
BTN131114 | 蛋白质研究 | ABTS溶液(7mM) |
BTN101123 | 蛋白质研究 | PVDF膜(0.45μm,13×20cm) |
BTN130528 | 蛋白质研究 | 植物专用蛋白酶抑制剂 |
BTN71202 | RNA纯化 | 血液RNA柱式提取试剂盒 |
BTN120684 | 克隆与表达 | 噻孢霉素溶液 |
BTN60605 | 其他生化试剂 | 20%PVP K30溶液(不含RNase) |
BTN90508 | 蛋白质研究 | 包涵体微量纯化试剂盒 |
BTN130906 | 探针标记及检测 | 超级杂交液(原位杂交) |
BTN60910 | DNA纯化 | 非冻型血液DNA保存液 |
BTN100936 | 基因结构和功能 | 人甲基化/非甲基化DNA标准品 |
BTN81203 | 蛋白质研究 | SDS-PAGE电泳液(干粉) |
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