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名称:SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC显色) 蛋白质研究
编号:QN1227
英文名:SABC(Rabbit IgG)-FITC Kit
规格:100T-200T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验,FITC荧光检测。
试剂盒组份:
封闭液(5% BSA)——————————10ml
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100ul
SABC-FITC浓缩液-—————————100ul
稀释液——————————————30ml
抗荧光衰减封片剂—————————10ml
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10min后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10min,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
3. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 孵育1h左右或20℃ 2h左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2min(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2min。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液,20-37℃孵育30min(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5min。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20min, PBS漂洗两次,接上述第3步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,再接上述第2步。
注意事项:如果背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01%—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
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