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-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
pET102 Directional TOPO(pET102DirectionalTOPO)
- 库存:
大量
- 供应商:
联迈生物
- 规格:
1ug
质粒名称: pET102 Directional TOPO
其他名称:
质粒大小(bp): 6315
抗性: Ampicillin
质粒类型: Bacterial Expression
是否病毒: Unspecified
启动子:
稳转或瞬转: Unspecified
组成型或诱导性: Unspecified
表达水平: Tightly controlled (use w/ BL21-AI)
蛋白标签:
测序引物:
GenBank号:
其他属性:
质粒图谱:
| Feature Name | Start | End | |
|---|---|---|---|
| pBRrevBam_primer | 106 | 125 | |
| T7_promoter | 209 | 227 | |
| lacO | 227 | 254 | |
| T7_transl_en_RBS | 272 | 288 | |
| His_patch_thio | 298 | 626 | |
| EK | 643 | 657 | |
| V5 | 700 | 741 | |
| 6xHIS | 751 | 768 | |
| T7_terminator | 783 | 911 | |
| T7_Terminal_primer | 843 | 825 | |
| AmpR_promoter | 1436 | 1464 | |
| Ampicillin | 1506 | 2366 | |
| pBR322_origin | 2521 | 3140 | |
| pGEX_3_primer | 3536 | 3558 | |
| ROP | 3743 | 3552 | |
| lacI | 6146 | 5055 |
| ORF | Start | End | |
|---|---|---|---|
| ORF frame 1 | 768 | 256 | |
| ORF frame 1 | 298 | 771 | |
| ORF frame 3 | 1506 | 2366 | |
| ORF frame 3 | 4999 | 4382 | |
| ORF frame 2 | 4577 | 5272 | |
| ORF frame 2 | 6014 | 5055 | |
| ORF frame 1 | 72 | 5887 |
| Enzyme Name | Cut |
|---|---|
| BglII | 189 |
| XbaI | 255 |
| AflII | 352 |
| SmaI | 494 |
| XmaI | 492 |
| BamHI | 634 |
| SacI | 689 |
| HindIII | 691 |
| AgeI | 745 |
| AatII | 1374 |
| PstI | 2051 |
| MscI | 4211 |
| NruI | 4683 |
| EagI | 4714 |
| HpaI | 5280 |
| ApaI | 5579 |
| BclI | 5768 |
质粒序列:
| 1 | CAAGGAGATG | GCGCCCAACA | GTCCCCCGGC | CACGGGGCCT | GCCACCATAC | 50 |
| 51 | CCACGCCGAA | ACAAGCGCTC | ATGAGCCCGA | AGTGGCGAGC | CCGATCTTCC | 100 |
| 101 | CCATCGGTGA | TGTCGGCGAT | ATAGGCGCCA | GCAACCGCAC | CTGTGGCGCC | 150 |
| 151 | GGTGATGCCG | GCCACGATGC | GTCCGGCGTA | GAGGATCGAG | ATCTCGATCC | 200 |
| 201 | CGCGAAATTA | ATACGACTCA | CTATAGGGGA | ATTGTGAGCG | GATAACAATT | 250 |
| 251 | CCCCTCTAGA | AATAATTTTG | TTTAACTTTA | AGAAGGAGAT | ATACATAATG | 300 |
| 301 | GGATCTGATA | AAATTATTCA | TCTGACTGAT | GATTCTTTTG | ATACTGATGT | 350 |
| 351 | ACTTAAGGCA | GATGGTGCAA | TCCTGGTTGA | TTTCTGGGCA | CACTGGTGCG | 400 |
| 401 | GTCCGTGCAA | AATGATCGCT | CCGATTCTGG | ATGAAATCGC | TGACGAATAT | 450 |
| 451 | CAGGGCAAAC | TGACCGTTGC | AAAACTGAAC | ATCGATCACA | ACCCGGGCAC | 500 |
| 501 | TGCGCCGAAA | TATGGCATCC | GTGGTATCCC | GACTCTGCTG | CTGTTCAAAA | 550 |
| 551 | ACGGTGAAGT | GGCGGCAACC | AAAGTGGGTG | CACTGTCTAA | AGGTCAGTTG | 600 |
| 601 | AAAGAGTTCC | TCGACGCTAA | CCTGGCCGGC | TCTGGATCCG | GTGATGACGA | 650 |
| 651 | TGACAAGCTG | GGAATTGATC | CCTTCACCAA | GGGCGAGCTC | AAGCTTGAAG | 700 |
| 701 | GTAAGCCTAT | CCCTAACCCT | CTCCTCGGTC | TCGATTCTAC | GCGTACCGGT | 750 |
| 751 | CATCATCACC | ATCACCATTG | AGTTTGATCC | GGCTGCTAAC | AAAGCCCGAA | 800 |
| 801 | AGGAAGCTGA | GTTGGCTGCT | GCCACCGCTG | AGCAATAACT | AGCATAACCC | 850 |
| 851 | CTTGGGGCCT | CTAAACGGGT | CTTGAGGGGT | TTTTTGCTGA | AAGGAGGAAC | 900 |
| 901 | TATATCCGGA | TATCCACAGG | ACGGGTGTGG | TCGCCATGAT | CGCGTAGTCG | 950 |
| 951 | ATAGTGGCTC | CAAGTAGCGA | AGCGAGCAGG | ACTGGGCGGC | GGCCAAAGCG | 1000 |
| 1001 | GTCGGACAGT | GCTCCGAGAA | CGGGTGCGCA | TAGAAATTGC | ATCAACGCAT | 1050 |
| 1051 | ATAGCGCTAG | CAGCACGCCA | TAGTGACTGG | CGATGCTGTC | GGAATGGACG | 1100 |
| 1101 | ATATCCCGCA | AGAGGCCCGG | CAGTACCGGC | ATAACCAAGC | CTATGCCTAC | 1150 |
| 1151 | AGCATCCAGG | GTGACGGTGC | CGAGGATGAC | GATGAGCGCA | TTGTTAGATT | 1200 |
| 1201 | TCATACACGG | TGCCTGACTG | CGTTAGCAAT | TTAACTGTGA | TAAACTACCG | 1250 |
| 1251 | CATTAAAGCT | AGCTTATCGA | TGATAAGCTG | TCAAACATGA | GAATTAATTC | 1300 |
| 1301 | TTGAAGACGA | AAGGGCCTCG | TGATACGCCT | ATTTTTATAG | GTTAATGTCA | 1350 |
| 1351 | TGATAATAAT | GGTTTCTTAG | ACGTCAGGTG | GCACTTTTCG | GGGAAATGTG | 1400 |
| 1401 | CGCGGAACCC | CTATTTGTTT | ATTTTTCTAA | ATACATTCAA | ATATGTATCC | 1450 |
| 1451 | GCTCATGAGA | CAATAACCCT | GATAAATGCT | TCAATAATAT | TGAAAAAGGA | 1500 |
| 1501 | AGAGTATGAG | TATTCAACAT | TTCCGTGTCG | CCCTTATTCC | CTTTTTTGCG | 1550 |
| 1551 | GCATTTTGCC | TTCCTGTTTT | TGCTCACCCA | GAAACGCTGG | TGAAAGTAAA | 1600 |
| 1601 | AGATGCTGAA | GATCAGTTGG | GTGCACGAGT | GGGTTACATC | GAACTGGATC | 1650 |
| 1651 | TCAACAGCGG | TAAGATCCTT | GAGAGTTTTC | GCCCCGAAGA | ACGTTTTCCA | 1700 |
| 1701 | ATGATGAGCA | CTTTTAAAGT | TCTGCTATGT | GGCGCGGTAT | TATCCCGTGT | 1750 |
| 1751 | TGACGCCGGG | CAAGAGCAAC | TCGGTCGCCG | CATACACTAT | TCTCAGAATG | 1800 |
| 1801 | ACTTGGTTGA | GTACTCACCA | GTCACAGAAA | AGCATCTTAC | GGATGGCATG | 1850 |
| 1851 | ACAGTAAGAG | AATTATGCAG | TGCTGCCATA | ACCATGAGTG | ATAACACTGC | 1900 |
| 1901 | GGCCAACTTA | CTTCTGACAA | CGATCGGAGG | ACCGAAGGAG | CTAACCGCTT | 1950 |
| 1951 | TTTTGCACAA | CATGGGGGAT | CATGTAACTC | GCCTTGATCG | TTGGGAACCG | 2000 |
| 2001 | GAGCTGAATG | AAGCCATACC | AAACGACGAG | CGTGACACCA | CGATGCCTGC | 2050 |
| 2051 | AGCAATGGCA | ACAACGTTGC | GCAAACTATT | AACTGGCGAA | CTACTTACTC | 2100 |
| 2101 | TAGCTTCCCG | GCAACAATTA | ATAGACTGGA | TGGAGGCGGA | TAAAGTTGCA | 2150 |
| 2151 | GGACCACTTC | TGCGCTCGGC | CCTTCCGGCT | GGCTGGTTTA | TTGCTGATAA | 2200 |
| 2201 | ATCTGGAGCC | GGTGAGCGTG | GGTCTCGCGG | TATCATTGCA | GCACTGGGGC | 2250 |
| 2251 | CAGATGGTAA | GCCCTCCCGT | ATCGTAGTTA | TCTACACGAC | GGGGAGTCAG | 2300 |
| 2301 | GCAACTATGG | ATGAACGAAA | TAGACAGATC | GCTGAGATAG | GTGCCTCACT | 2350 |
| 2351 | GATTAAGCAT | TGGTAACTGT | CAGACCAAGT | TTACTCATAT | ATACTTTAGA | 2400 |
| 2401 | TTGATTTAAA | ACTTCATTTT | TAATTTAAAA | GGATCTAGGT | GAAGATCCTT | 2450 |
| 2451 | TTTGATAATC | TCATGACCAA | AATCCCTTAA | CGTGAGTTTT | CGTTCCACTG | 2500 |
| 2501 | AGCGTCAGAC | CCCGTAGAAA | AGATCAAAGG | ATCTTCTTGA | GATCCTTTTT | 2550 |
| 2551 | TTCTGCGCGT | AATCTGCTGC | TTGCAAACAA | AAAAACCACC | GCTACCAGCG | 2600 |
| 2601 | GTGGTTTGTT | TGCCGGATCA | AGAGCTACCA | ACTCTTTTTC | CGAAGGTAAC | 2650 |
| 2651 | TGGCTTCAGC | AGAGCGCAGA | TACCAAATAC | TGTCCTTCTA | GTGTAGCCGT | 2700 |
| 2701 | AGTTAGGCCA | CCACTTCAAG | AACTCTGTAG | CACCGCCTAC | ATACCTCGCT | 2750 |
| 2751 | CTGCTAATCC | TGTTACCAGT | GGCTGCTGCC | AGTGGCGATA | AGTCGTGTCT | 2800 |
| 2801 | TACCGGGTTG | GACTCAAGAC | GATAGTTACC | GGATAAGGCG | CAGCGGTCGG | 2850 |
| 2851 | GCTGAACGGG | GGGTTCGTGC | ACACAGCCCA | GCTTGGAGCG | AACGACCTAC | 2900 |
| 2901 | ACCGAACTGA | GATACCTACA | GCGTGAGCTA | TGAGAAAGCG | CCACGCTTCC | 2950 |
| 2951 | CGAAGGGAGA | AAGGCGGACA | GGTATCCGGT | AAGCGGCAGG | GTCGGAACAG | 3000 |
| 3001 | GAGAGCGCAC | GAGGGAGCTT | CCAGGGGGAA | ACGCCTGGTA | TCTTTATAGT | 3050 |
| 3051 | CCTGTCGGGT | TTCGCCACCT | CTGACTTGAG | CGTCGATTTT | TGTGATGCTC | 3100 |
| 3101 | GTCAGGGGGG | CGGAGCCTAT | GGAAAAACGC | CAGCAACGCG | GCCTTTTTAC | 3150 |
| 3151 | GGTTCCTGGC | CTTTTGCTGG | CCTTTTGCTC | ACATGTTCTT | TCCTGCGTTA | 3200 |
| 3201 | TCCCCTGATT | CTGTGGATAA | CCGTATTACC | GCCTTTGAGT | GAGCTGATAC | 3250 |
| 3251 | CGCTCGCCGC | AGCCGAACGA | CCGAGCGCAG | CGAGTCAGTG | AGCGAGGAAG | 3300 |
| 3301 | CGGAAGAGCG | CCTGATGCGG | TATTTTCTCC | TTACGCATCT | GTGCGGTATT | 3350 |
| 3351 | TCACACCGCA | ATGGTGCACT | CTCAGTACAA | TCTGCTCTGA | TGCCGCATAG | 3400 |
| 3401 | TTAAGCCAGT | ATACACTCCG | CTATCGCTAC | GTGACTGGGT | CATGGCTGCG | 3450 |
| 3451 | CCCCGACACC | CGCCAACACC | CGCTGACGCG | CCCTGACGGG | CTTGTCTGCT | 3500 |
| 3501 | CCCGGCATCC | GCTTACAGAC | AAGCTGTGAC | CGTCTCCGGG | AGCTGCATGT | 3550 |
| 3551 | GTCAGAGGTT | TTCACCGTCA | TCACCGAAAC | GCGCGAGGCA | GCTGCGGTAA | 3600 |
| 3601 | AGCTCATCAG | CGTGGTCGTG | AAGCGATTCA | CAGATGTCTG | CCTGTTCATC | 3650 |
| 3651 | CGCGTCCAGC | TCGTTGAGTT | TCTCCAGAAG | CGTTAATGTC | TGGCTTCTGA | 3700 |
| 3701 | TAAAGCGGGC | CATGTTAAGG | GCGGTTTTTT | CCTGTTTGGT | CACTGATGCC | 3750 |
| 3751 | TCCGTGTAAG | GGGGATTTCT | GTTCATGGGG | GTAATGATAC | CGATGAAACG | 3800 |
| 3801 | AGAGAGGATG | CTCACGATAC | GGGTTACTGA | TGATGAACAT | GCCCGGTTAC | 3850 |
| 3851 | TGGAACGTTG | TGAGGGTAAA | CAACTGGCGG | TATGGATGCG | GCGGGACCAG | 3900 |
| 3901 | AGAAAAATCA | CTCAGGGTCA | ATGCCAGCGC | TTCGTTAATA | CAGATGTAGG | 3950 |
| 3951 | TGTTCCACAG | GGTAGCCAGC | AGCATCCTGC | GATGCAGATC | CGGAACATAA | 4000 |
| 4001 | TGGTGCAGGG | CGCTGACTTC | CGCGTTTCCA | GACTTTACGA | AACACGGAAA | 4050 |
| 4051 | CCGAAGACCA | TTCATGTTGT | TGCTCAGGTC | GCAGACGTTT | TGCAGCAGCA | 4100 |
| 4101 | GTCGCTTCAC | GTTCGCTCGC | GTATCGGTGA | TTCATTCTGC | TAACCAGTAA | 4150 |
| 4151 | GGCAACCCCG | CCAGCCTAGC | CGGGTCCTCA | ACGACAGGAG | CACGATCATG | 4200 |
| 4201 | CGCACCCGTG | GCCAGGACCC | AACGCTGCCC | GAGATGCGCC | GCGTGCGGCT | 4250 |
| 4251 | GCTGGAGATG | GCGGACGCGA | TGGATATGTT | CTGCCAAGGG | TTGGTTTGCG | 4300 |
| 4301 | CATTCACAGT | TCTCCGCAAG | AATTGATTGG | CTCCAATTCT | TGGAGTGGTG | 4350 |
| 4351 | AATCCGTTAG | CGAGGTGCCG | CCGGCTTCCA | TTCAGGTCGA | GGTGGCCCGG | 4400 |
| 4401 | CTCCATGCAC | CGCGACGCAA | CGCGGGGAGG | CAGACAAGGT | ATAGGGCGGC | 4450 |
| 4451 | GCCTACAATC | CATGCCAACC | CGTTCCATGT | GCTCGCCGAG | GCGGCATAAA | 4500 |
| 4501 | TCGCCGTGAC | GATCAGCGGT | CCAATGATCG | AAGTTAGGCT | GGTAAGAGCC | 4550 |
| 4551 | GCGAGCGATC | CTTGAAGCTG | TCCCTGATGG | TCGTCATCTA | CCTGCCTGGA | 4600 |
| 4601 | CAGCATGGCC | TGCAACGCGG | GCATCCCGAT | GCCGCCGGAA | GCGAGAAGAA | 4650 |
| 4651 | TCATAATGGG | GAAGGCCATC | CAGCCTCGCG | TCGCGAACGC | CAGCAAGACG | 4700 |
| 4701 | TAGCCCAGCG | CGTCGGCCGC | CATGCCGGCG | ATAATGGCCT | GCTTCTCGCC | 4750 |
| 4751 | GAAACGTTTG | GTGGCGGGAC | CAGTGACGAA | GGCTTGAGCG | AGGGCGTGCA | 4800 |
| 4801 | AGATTCCGAA | TACCGCAAGC | GACAGGCCGA | TCATCGTCGC | GCTCCAGCGA | 4850 |
| 4851 | AAGCGGTCCT | CGCCGAAAAT | GACCCAGAGC | GCTGCCGGCA | CCTGTCCTAC | 4900 |
| 4901 | GAGTTGCATG | ATAAAGAAGA | CAGTCATAAG | TGCGGCGACG | ATAGTCATGC | 4950 |
| 4951 | CCCGCGCCCA | CCGGAAGGAG | CTGACTGGGT | TGAAGGCTCT | CAAGGGCATC | 5000 |
| 5001 | GGTCGAGATC | CCGGTGCCTA | ATGAGTGAGC | TAACTTACAT | TAATTGCGTT | 5050 |
| 5051 | GCGCTCACTG | CCCGCTTTCC | AGTCGGGAAA | CCTGTCGTGC | CAGCTGCATT | 5100 |
| 5101 | AATGAATCGG | CCAACGCGCG | GGGAGAGGCG | GTTTGCGTAT | TGGGCGCCAG | 5150 |
| 5151 | GGTGGTTTTT | CTTTTCACCA | GTGAGACGGG | CAACAGCTGA | TTGCCCTTCA | 5200 |
| 5201 | CCGCCTGGCC | CTGAGAGAGT | TGCAGCAAGC | GGTCCACGCT | GGTTTGCCCC | 5250 |
| 5251 | AGCAGGCGAA | AATCCTGTTT | GATGGTGGTT | AACGGCGGGA | TATAACATGA | 5300 |
| 5301 | GCTGTCTTCG | GTATCGTCGT | ATCCCACTAC | CGAGATATCC | GCACCAACGC | 5350 |
| 5351 | GCAGCCCGGA | CTCGGTAATG | GCGCGCATTG | CGCCCAGCGC | CATCTGATCG | 5400 |
| 5401 | TTGGCAACCA | GCATCGCAGT | GGGAACGATG | CCCTCATTCA | GCATTTGCAT | 5450 |
| 5451 | GGTTTGTTGA | AAACCGGACA | TGGCACTCCA | GTCGCCTTCC | CGTTCCGCTA | 5500 |
| 5501 | TCGGCTGAAT | TTGATTGCGA | GTGAGATATT | TATGCCAGCC | AGCCAGACGC | 5550 |
| 5551 | AGACGCGCCG | AGACAGAACT | TAATGGGCCC | GCTAACAGCG | CGATTTGCTG | 5600 |
| 5601 | GTGACCCAAT | GCGACCAGAT | GCTCCACGCC | CAGTCGCGTA | CCGTCTTCAT | 5650 |
| 5651 | GGGAGAAAAT | AATACTGTTG | ATGGGTGTCT | GGTCAGAGAC | ATCAAGAAAT | 5700 |
| 5701 | AACGCCGGAA | CATTAGTGCA | GGCAGCTTCC | ACAGCAATGG | CATCCTGGTC | 5750 |
| 5751 | ATCCAGCGGA | TAGTTAATGA | TCAGCCCACT | GACGCGTTGC | GCGAGAAGAT | 5800 |
| 5801 | TGTGCACCGC | CGCTTTACAG | GCTTCGACGC | CGCTTCGTTC | TACCATCGAC | 5850 |
| 5851 | ACCACCACGC | TGGCACCCAG | TTGATCGGCG | CGAGATTTAA | TCGCCGCGAC | 5900 |
| 5901 | AATTTGCGAC | GGCGCGTGCA | GGGCCAGACT | GGAGGTGGCA | ACGCCAATCA | 5950 |
| 5951 | GCAACGACTG | TTTGCCCGCC | AGTTGTTGTG | CCACGCGGTT | GGGAATGTAA | 6000 |
| 6001 | TTCAGCTCCG | CCATCGCCGC | TTCCACTTTT | TCCCGCGTTT | TCGCAGAAAC | 6050 |
| 6051 | GTGGCTGGCC | TGGTTCACCA | CGCGGGAAAC | GGTCTGATAA | GAGACACCGG | 6100 |
| 6101 | CATACTCTGC | GACATCGTAT | AACGTTACTG | GTTTCACATT | CACCACCCTG | 6150 |
| 6151 | AATTGACTCT | CTTCCGGGCG | CTATCATGCC | ATACCGCGAA | AGGTTTTGCG | 6200 |
| 6201 | CCATTCGATG | GTGTCCGGGA | TCTCGACGCT | CTCCCTTATG | CGACTCCTGC | 6250 |
| 6251 | ATTAGGAAGC | AGCCCAGTAG | TAGGTTGAGG | CCGTTGAGCA | CCGCCGCCGC | 6300 |
| 6301 | AAGGAATGGT | GCATG | 6315 |
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文献和实验中,现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG,就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体:pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®,这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体:pET100/D
不需要切割带来的二次纯化。4,改良版PET-32a:带His标签(N端)+TrxA(硫氧还蛋白)说明:此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签,可以通过一步亲和层析得到纯化,TrxA(硫氧还蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血酶位点)和Linker(102bp)序列。5,改良版PET-NusA:带His标签(N端)+NusA(角质蛋白A)说明:此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签,可以通过一步亲和层析得到纯化,NusA(角质蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血
。(含有两个T7启动子) 说明:此载体借用DsbA+DsbC蛋白的分子伴侣的性质,与所需的目的蛋白尤其是一类富含二硫键的目的蛋白进行共表达,辅助目的蛋白形成正确的空间折叠状态,共表达的优点是对表达的蛋白不需要切割带来的二次纯化。 4,改良版PET-32a:带His标签(N端)+TrxA(硫氧还蛋白) 说明:此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签,可以通过一步亲和层析得到纯化,TrxA(硫氧还蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血酶位点)和Linker(102bp)序列
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