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- 2026年01月19日
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- 技术资料
- 库存：
5
- 供应商：
深圳市科润达生物工程有限公司
- 检测范围：
科研
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
用于体外定量测定人血清中胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）的含量。
- 适应物种：
人
- 标记物：
IGFBP-3
- 样本：
血清
- 规格：
96T
【产品规格】
96T
【预期用途】
试剂盒用于体外定量测定人血清中胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）的含量。
【前言简介】
胰岛素样生长因子（IGF）系统是正常体内生长和再生的主要调节因子，影响细胞增殖，分化和细胞凋亡。 此外，IGF-系统似乎改变胰岛素敏感性和长期性葡萄糖代谢。 最后，许多流行病学，实验和临床资料表明，IGF-系统也涉及几种常见癌症的发展以及常见疾病如动脉粥样硬化和2型糖尿病等。
IGF家族由一系列密切相关的多肽组成，其包括两个主要促进生长的多肽，IGF-I和IGF-II，6种特异性高亲和力IGF结合蛋白（IGFBP-1至-6）和一个大的非IGF结合糖蛋白，“酸不稳定亚单位”（ALS）。
IGFBP-3是最丰富的IGF结合蛋白，占健康人循环IGF结合能力的75％以上。 IGFBP-3与IGFBP-5共享功能特性，因为两种肽都能与ALS和IGF-I或-II的形成高分子量约150千道尔顿的三元复合物。 然而，IGFBP-5循环浓度比IGFBP-3低得多，而在健康受试者中，三元复合物携带多达90％的IGFBP-3但只有约50％的IGFBP-5。
最初IGFBP被认为是IGF-载体蛋白，稳定血浆IGF水平并控制IGF从循环中流出至血管外隔室。此外，人们认为 IGFBP复合IGF在生物学上或多或少无活性，被剥夺了与IGF-1受体相互作用的能力。但是，很快人们就发现，在一些实验设置中，IGFBP激活而不是抑制IGF-I介导的作用，因此，IGFBP通常被称为IGF-1生物活性的调节剂。另外，大多数的IGFBP，特别是IGFBP-3，发挥着IGF-I和IGF-I受体的独立作用，可能涉及位于细胞表面和细胞内的特定受体间的相互作用。例如，IGFBP-3现在被认为是作为抗癌分子服务的，它可以明显防止几种常见的癌症，同时IGFBP-3在培养的脂肪细胞中对胰岛素信号的传导作用也被提出。
三元复合物的转换非常缓慢，一天中IGFBP-3的血浆浓度始终保持稳定，而不受短期营养变化的影响。 因此，IGFBP-3的水平可以由一个单独测量确定。 GH是IGFBP-3以及IGF-I和ALS的主要调节因子，因此，三种多肽水平在青春期生长期间增加，其后随着年龄的增长逐渐下降。 在儿童中，IGFBP-3已显示与24小时GH分泌相关，因此，IGFBP-3可能对儿童GH缺陷的诊断有帮助。
【检测原理】
GFBP3-ELISA是固相酶扩增敏感性对微孔板进行的免疫测定。标准品和样品与包被的捕获单克隆抗体（MAb 1）和用辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体（MAb 2）反应。经过孵育形成一个三明治结构：包被的MAb 1 - -人IGFBP3--MAb 2-HRP，洗涤微孔板以除去未结合的酶标记抗体。通过显色测量结合的酶标记抗体反应。加入显色溶液（TMB）并孵育。添加终止液终止反应，然后在适当波长下读取微孔板。被测物含量的显色程度与人IGFBP3浓度成正比。绘制标准曲线，样品中IGFBP3浓度通过标准曲线可直接读取。
【试剂盒组成成分】
| 成分 | 规格（96T） | 状态 | |
PLATE |
96孔微量滴定板，包被了IGFBP3（单克隆抗体） | 96孔 | 即用型 |
AbHRP CONC |
酶标记物浓缩液：HRP标记的抗IGFBP3（单抗），含procin和牛血清白蛋白的柠檬酸缓冲液 | 0.5ml*1瓶 | 用酶标记物缓冲液20倍稀释 |
CONJ BUF |
酶标记物缓冲液：含有牛血清白蛋白和百里酚的tris缓冲液 | 10ml*1瓶 | 即用型 |
CAL N |
标准品-N=1-5，含牛血清和百里酚的磷酸盐缓冲液。 瓶体标签上有具体浓度。 标准品都是预稀释过的，用稀释液做0标准品。 |
5瓶冻干粉 | 加入1ml蒸馏水 |
DIL BUF |
稀释液：含有牛血清，牛白蛋白和百里酚的磷酸盐缓冲液 | 100ml*1瓶 | 即用型 |
CONTROL N |
质控品N=1或2 ，含有人血清和百里酚，质控品是预稀释过的 | 2瓶冻干粉 | 加入1ml蒸馏水 |
WASH SOLN CONC |
洗涤液（tris-HCL） | 10ml*1瓶 | 蒸馏水200倍稀 释（使用电磁搅拌器） |
CHROM TMB |
底物液：TMB | 12ml*1瓶 | 即用型 |
| STOP SOLN | 终止液：1.0N盐酸 | 12ml*1瓶 | 即用型 |
用稀释液做0标准品。
校准品是针对NIBSC / WHO重组的IGFBP-3的标准化物质，参考试剂编号93/560。
所需材料（未提供）
高质量的蒸馏水
50ul,100ul,1ml的微量移液器（推荐使用一次性塑料枪头的移液器）
稀释样品的塑料管
旋涡搅拌器
磁力搅拌器
酶标仪（450或者650nm）
洗板机
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文献和实验ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书，可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期，保证所有试剂按说明书上的建议正确保存； 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象，如沉淀或变色等； 3. 底物溶液应为无色； 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液（样品、标准品及其他试剂）时，及时更换枪头，避免交叉污染； 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致； 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X 轴上为标准品浓度，Y 轴为对应的 OD 值）。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下： 第一步: 输入 OD 值
一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中
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