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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
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名称:禽流感H7N9病毒双重荧光PCR检测试剂盒促销
等级:科研试剂
产地:国产|进口
编号:SYA151
品牌:百奥莱博
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禽流感H7N9病毒双重荧光PCR检测试剂盒促销关键词:百奥莱博,SYA151,禽流感H7N9病毒双重荧光PCR检测试剂盒
·流感嗜血杆菌/肺炎链球菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA055
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·脊髓灰质炎病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA207
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·炭疽杆菌(BA)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA499
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对炭疽杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适用于检测发病部位新鲜脓液、渗出物,吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、外周血等样本中炭疽杆菌(BA)DNA,用于炭疽病等疾病的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(50T/Kit)
组份 数量 规格
BA反应液(BA-qPCR MIX) 1管 1mL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
阴性对照(NTC) 1管 250μL/管
BA阳性对照(BA-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型:新鲜脓液、渗出物、吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、牛外周血。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.1.2.2 血液:无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
6.1.2.3 体液等液体标本:取0.5-1mL左右,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.2 样本前处理:
6.2.1 组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置于洁净的1.5mL离心管中;
6.2.2 血液样本:直接取200uL抗凝血,转至一洁净的1.5mL离心管中,加入1mL双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm离心5min,弃上清(若沉淀颜色呈红色,请再重复洗涤一次);
6.2.3 粪便等固体标本:挑取米粒大小粪便,放置于0.5mL生理盐水的离心管中,震荡混匀,13000rpm离心2min,弃上清;
6.2.4 液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BA-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 20µL N×20µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BA-PTC)4μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(BA-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明炭疽杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行炭疽杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA488
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介
本试剂盒用一对结核杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对结核杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适合于检测外周血等样本中结核杆菌DNA,用于结核病等疾病的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(40T/Kit)
组份 数量 规格
TB反应液(TB-qPCR MIX) 1管 560μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
TB阳性对照(TB-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型:痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水,其他肺外感染可取血、相应部位分泌液或组织细胞等。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.1.2.2 血液:无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
6.1.2.3 液体标本:取0.5-1mL左右,置入1.5ml洁净EP管,立即送检;
6.2 样本前处理:
6.2.1 脑脊液和胸、腹水:13000rpm离心3min沉淀集菌,去上清;
6.2.2 痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本:经4%NaOH(痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1)处理15min;尿标本加5%鞣酸、5%乙酸各0.5mL于锥形量筒内静置,处理后吸去上清,沉淀直接用于提取结核杆菌DNA或者经酸中和后接种培养,然后再对培养物提取DNA。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(TB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TB-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(TB-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明结核杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明结核杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行结核杆菌real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明结核杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验。临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足,基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下,利用现有的试剂研发平台,人感染猪流感实时荧光定量PCR诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量PCR技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前,针对猪与猪传染的传统猪流感疫情,近年来我国科技人员经过不懈努力,探索快速检测与诊断方法].人感染猪流感疫情发生后,美国疾病预防控制中心(CDC)于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南
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CANDOR BIOSCIENCE: 关于ELISA板稳定性的技术探讨与比较
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