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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒优惠在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒优惠,产品信息:
类别:病毒PCR检测试剂盒
产品名 | 产品编号 | 等级含量 | 包装规格 |
脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒 | SYA241 | 科研试剂 | 48次/盒 |
产地:国产|进口
规格:48次/盒
编号:SYA241
品牌:百奥莱博
一、简介:
本试剂盒用一对禽脑脊髓炎病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对禽脑脊髓炎病毒RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适合于检测脑组织、内脏组织、血液等标本中禽脑脊髓炎病毒(AEV)RNA,用于禽脑脊髓炎病毒(AEV)感染的辅助诊断及流行病学调查,其检测结果仅供参考
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
禽脑脊髓炎荧光qRT-PCR反应液(AEV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(AEV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
病死或扑杀禽的脑部组织2g;待检活禽,用注射器取血5mL 至EDTA-2Na 抗凝管。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。
棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm 离心2min,取上清液100μL 于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(AEV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(AEV-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(AEV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明AEV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明AEV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行AEV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明AEV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒优惠专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
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使用离心机应注意什么?
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格 平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。
更多有关脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒优惠的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
编号 | 类别 | 名称 |
SYA658 | 动物疫病ELISA检测试剂盒 | 牛口蹄疫A型抗体ELISA检测试剂盒 |
SYA270 | 转基因PCR检测试剂盒 | 玉米转基因MON810单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA203 | 病毒PCR检测试剂盒 | 札如病毒单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA275 | 转基因PCR检测试剂盒 | 玉米特异性基因Invertase单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA513 | 动物疫病PCR检测试剂盒 | 对虾白斑病毒(WSSV)单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA107 | 细菌PCR检测试剂盒 | 大肠杆菌致贺毒素(Stx1)/(Stx2)双重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA381 | 动物疫病PCR检测试剂盒 | 禽流感病毒H1亚型(AIV-H1)单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA090 | 细菌PCR检测试剂盒 | 肠产毒性大肠杆菌(ETEC)耐热肠毒素(ST-elt)单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA079 | 细菌PCR检测试剂盒 | 沙门菌及痢疾杆菌单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA051 | 细菌PCR检测试剂盒 | 超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA639 | 动物疫病ELISA检测试剂盒 | 猪乙型脑炎抗体ELISA检测试剂盒 |
SYA048 | 细菌PCR检测试剂盒 | 鲍曼不动杆菌单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA148 | 病毒PCR检测试剂盒 | 季节性H1流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA193 | 病毒PCR检测试剂盒 | 博卡(Boca)/呼吸道合胞(RSV)/偏肺(MPV)病毒三重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA548 | 动物疫病PCR检测试剂盒 | 猪瘟(CSFV)单重凝胶PCR检测试剂盒 |
SYA108 | 细菌PCR检测试剂盒 | 大肠杆菌致贺毒素黏附抹平因子(Eae)/溶血素(Hly)双重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA162 | 病毒PCR检测试剂盒 | 流感病毒N2型单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA572 | 动物疫病PCR检测试剂盒 | 猪伪狂犬(PRV)单重凝胶PCR检测试剂盒 |
SYA127 | 细菌PCR检测试剂盒 | 立克次体通用单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA240 | 病毒PCR检测试剂盒 | 蜱传出脑炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA075 | 细菌PCR检测试剂盒 | 霍乱弧菌霍乱毒素基因(ctxA)单重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA020 | 细菌PCR检测试剂盒 | 肉毒杆菌EF型双重荧光PCR检测试剂盒 |
SYA239 | 病毒PCR检测试剂盒 | 蜱传出血热病毒单重荧光PCR检测试剂盒 |
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