- ¥110 - 1890
- 百奥莱博
- 北京
- WE0163-SJQ
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
PlaPure Midi Extraction Kit
- 库存：
635
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京高纯质粒中提试剂盒优惠促销是高品质的DNA纯化产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多高纯质粒中提试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称：北京高纯质粒中提试剂盒优惠促销
产地：国产|进口
编号：WE0163
品牌：百奥莱博
本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer P1 | 30ml |
| Buffer P2 | 30ml |
| Buffer N3 | 40ml |
| Buffer PB | 10ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 10ml |
| Buffer EB | 10ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 600μl |
| 吸附柱DL及收集管 | 50套 |
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。
操作步骤：
1、取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及N3的量需加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入500μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入700μl Buffer N3，立即上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13000rpm离心10分钟。
注意：Buffer N3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DL中，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，如果样品体积大于750μl可分批加入。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
8、将吸附柱重新放回收集管中，13000rpm离心1分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜中间部位加入100-200μl Buffer EB，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。
储存条件：室温(15～30℃)
关于北京高纯质粒中提试剂盒优惠促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
65-23-6 Vitamin B6 维生素B6
BTN130544 AEBSF溶液 AEBSF Solution
ARB10187 人αN已酰*基葡糖苷酶(αNAG)免费代测 Human αn-acetylglucosaminidase,αnag ELISA KIT
L-精*酸L-谷*酸盐 Fast red TR 4320-30-3
PY02-120-1 MC培养基 250克
ARB10318 人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)Elisa分析 Human neutrophil activating protein-2,nap-2 ELISA KIT
F020110 山羊抗乙肝核心抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBcAg
D-(+)-苹果酸 Methyl red sodiu*(代"m") salt 636-61-3
嘌呤霉素盐*(代"酸")盐 L-(+)-Lactic acid 58-58-2
BL1222 0.4% TTC染色液
ARB11003 人补体3(C3)elisa检测说明书 Human complement 3,c3 ELISA KIT
CYB164026 羊抗马IgG(1：500～1000)-HRP
北京高纯质粒中提试剂盒优惠促销关键词：高纯质粒中提试剂盒,PlaPure Midi Extraction Kit ,WE0163
·IPTG溶液(50mg/ml)
编号：WE0219
英文名称：IPTG Solution(50mg/ml)
规格：5ml
·柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)
编号：WE0175
英文名称：Blood Genomic DNA Mini Extraction Kit(0.1-1ml)
规格：50次|200次
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1ml的全血，最高得率可达30μg，可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer RCL | 125ml | 2×260ml |
| Buffer GR | 15ml | 50ml |
| Buffer GL | 15ml | 50ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml | 52ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 50ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 蛋白酶K | 12.5 mg | 50 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml | 5ml |
| 吸附柱 DM及收集管 | 50套 | 200套 |
产品特点
1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大：可从0.1-1.0ml的全血中提取基因组DNA。
3、兼容性强：适用于处理各种抗凝血液和细胞样本。
自备试剂：无水乙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、本试剂盒最多可以提取0.1-1ml全血样品或1×107个白细胞。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。
6、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。
操作步骤：
1、样品处理：
1.1、提取200 ul血液样品时，向离心管(自备)中加入样本后，可直接进行下一步实验。
1.2、当血液样本量小于200μl时，加入Buffer GR补足至200μl，再进行下一步实验。
1.3、当血液样本量超过200μl时，加入1~2.5倍体积的Buffer RCL，轻轻涡旋或颠倒混匀，12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，小心吸弃上清液，如果沉淀中还有红色，可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200μl Buffer GR，震荡至彻底混匀,再进行下一步实验。
1.4、如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血，其红细胞为有核细胞，血液样本量为5-20μl，可加入Buffer GR，补足至200μl后进行后续实验。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
2、向以上溶液中加入20μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入200μl Buffer GL，震荡至彻底混匀。
注意：不要将蛋白酶K 和Buffer GL进行预混。
4、56℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5、加入200μl无水乙醇，颠倒混匀数次。短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1 分钟。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件：室温(15～30℃)。
北京高纯质粒中提试剂盒优惠促销关键词：高纯质粒中提试剂盒,PlaPure Midi Extraction Kit ,WE0163
·快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)
编号：WE0142
英文名称：BaFaSYBR Mixture(Low ROX)
规格：5ml
本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。
产品组成：
| 组份 | WE0141-5ml | WE0142-5ml | WE0143-5ml |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
| 50×Low ROX | - | 200μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 200μl |
| ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系：
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaFaSYBR Mixture | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 20 s | |
| 变性 | 95℃ | 3 s | 35-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 s | |
| 融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
| 60℃ | 1 min | ||
| 95℃ | 15 s | ||
| 60℃ | 15 s |
注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
储存条件：-20℃，避免反复冻融
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