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北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌

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  • ¥150 - 2020
  • 百奥莱博
  • 北京
  • WE0208-TWM
  • 2025年07月11日
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    • 保存条件

      室温(15~30℃)

    • 保质期

      长期

    • 英文名

      MagBeads Blood DNA Extraction Kit

    • 库存

      405

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌是高品质的DNA纯化产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多磁珠法血液DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。


    名称:北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌
    产地:国产|进口
    英文名:MagBeads Blood DNA Extraction Kit
    品牌:百奥莱博
    编号:WE0208
    规格:96次
      本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的血液DNA提取方法,适用于从新鲜或冷冻抗凝血(柠檬酸盐、EDTA、肝素处理过的血液样品)中提取血液DNA。在离液盐存在时,DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。经两步漂洗以及一步快速漂洗(MW3的快速漂洗对于提高DNA纯度有很大帮助)后,高纯度的DNA被洗脱于EB或去离子水中。DNA得率与样品的类型,储存条件、时间以及样品中白细胞的含量有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(260/280的比值在1.7-1.9之间,260/230的比值大于1.5),完整度高(最高可达50 kb),可用于克隆,定量PCR,芯片测序等下游反应。

    试剂盒组成

     
    组份 96次
    Buffer ML 24ml
    Buffer GW1(浓缩液) 80ml
    Buffer GW2(浓缩液) 50ml
    Buffer EB 30ml
    蛋白酶K 2×25mg
    蛋白酶K 储存液 2×1.25ml
    Magbeads PN 1ml


    自备仪器及试剂

    1、手动单管操提取:
    1)恒温混匀仪
    2)2/15ml磁力架
    3)异丙醇、无水乙醇

    2、手动96孔深孔板提取:
    1)恒温混匀仪
    2)废液抽吸系统
    3)手动连续分液器
    4)电动连续分液器
    5)手动连续分液器分液管(25ml)
    6)96孔深孔板磁力架
    7)异丙醇、无水乙醇

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
    2、异丙醇与Magbeads混合物的制备(以制备提取10个样品所需量为例)
    1)向合适容量(加入异丙醇和Magbeads后总体积小于离心管容积的2/3)的离心管中加入3.3ml【0.3×(10+1)=3.3】的异丙醇。
    注意:如用移液器加入异丙醇,需用移液器将枪头在异丙醇吹吸两次后再缓慢吸取异丙醇。
    2)向上一步的离心管中加入220μl【20×(10+1)=220】Magbeads
    注意:Magbeads加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀,异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡20秒钟使其成为均一的溶液。
    3)异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡10秒钟使其成为均一的溶液。
    3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
    4、样品应避免反复冻融,否则会导致提取得到的DNA片段较小且提取得率低。
    5、次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
    6、如Buffer ML中出现沉淀,请在56℃水浴锅中重新溶解,摇匀后即可使用。
    7、实验过程中,磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异,实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象,请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

    操作步骤

    一、手动单管操作:
    1、向1.5ml的离心管中加入20μl 蛋白酶K ,之后加入200μl的血液。
    注意:
    1)冷冻抗凝血液需提前在室温(15~30℃)下放置,融化混匀。
    2)如血液体积大于或小于200μl,蛋白酶K 、Buffer ML和异丙醇与磁珠混合物的用量需按比例调整。
    2、向离心管中加入200μl Buffer ML,涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后,将离心管放于56℃水浴锅中孵育15分钟,期间涡旋震荡混匀2次。
    3、将离心管从水浴锅中取出,短暂离心后室温放置5分钟。加入彻底混匀的320μl异丙醇与Magbeads混合物,涡旋震荡混匀5秒钟后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀
    仪上震荡混匀5分钟或将离心管连续颠倒混匀10分钟。
    4、将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    5、将离心管从磁力架上取下,加入750 ul Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    6、重复步骤5。
    7、将离心管从磁力架上取下,加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    8、重复步骤7。
    9、保持离心管固定于磁力架上,用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液,之后室温放置5-10分钟,使乙醇挥发干净。
    注意:如果离心管侧壁上有液珠,可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上),之后彻底弃去无水乙醇。
    10、将离心管从磁力架上取下,加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟,或将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟,期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
    11、将离心管放于磁力架上静置2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

    二、手动96孔板操作:
    1、向2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入20μl 蛋白酶K ,之后加入200μl血液,并记录每孔中所加血液名称。
    注意:
    1)可将蛋白酶K 预先分装于8连管中,每管加入260μl。之后,用8通道移液器将蛋白酶K 分装于96孔深孔板中。
    2)血液需加到96孔深孔板的底部,避免血液触碰到孔的上部。
    2.向深孔板中用电动连续分液器或8通道移液器加入200μl Buffer ML。
    3.将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟,盖上硅胶盖后将深孔板放于56℃水浴锅中孵育15分钟,之后再将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
    4、将深孔板从恒温混匀仪上取下,用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入彻底混匀的320μl Magbeads与异丙醇混合物。盖上硅胶盖后,立即将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
    5、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    注意:用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值,使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
    6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
    7、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    8、重复步骤6-7。
    9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
    10、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    11、重复步骤9-10。
    12、用手动连续分液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇,之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
    13、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上,将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
    15、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入100-200μl Buffer EB,之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热,洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
    16、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟,用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

    储存条件:室温(15~30℃)

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    北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌关键词:磁珠法血液DNA提取试剂盒,WE0208,MagBeads Blood DNA Extraction Kit


    ·Pfu DNA Polymerase
    编号:WE0107
    英文名称:Pfu DNA Polymerase
    规格:500U
      Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性,因此在DNA扩增过程中具有纠错能力,是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性,对于高GC含量模板,提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基,不能直接用于T/A克隆,如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

    产品组成
    组份 500U
    Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl 100μl
    10×PCR Buffer 1.8ml

    注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

    活性定义
    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

    质量控制
    1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
    2、经检测无外源核酸酶活性;
    3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
    4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
    5、室温存放一个月,无明显活性改变。

    使用方法
    以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

    1、PCR反应体系
    试剂 50μl反应体系 终浓度
    10×PCR Buffer 5μl
    dNTP Mix,10 mM each 1μl 200μM each
    Forward Primer,10μM 2μl 0.4μM
    Reverse Primer,10μM 2μl 0.4μM
    Template DNA <0.5μg <0.5μg/50μl
    Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl 0.5μl 2.5 U/50μl
    ddH2O up to 50μl  

    注意:
    1)用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
    2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物,所以应先加dNTP后,再加Pfu酶到反应体系中,并立即进行PCR反应。

    2、PCR反应条件
    步骤 温度 时间 循环数
    预变性 94℃ 2 min  
    变性 94℃ 30 s 25-35 个循环
    退火 55-65℃ 30 s
    延伸 72℃ 60 s
    终延伸 72℃ 5 min  


    注意:
    1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。
    2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
    3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低,延伸时间根据所扩增片段大小设定,本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
    4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
    5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性,PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆,如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

    储存条件:-20℃,避免反复冻融。


    北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌关键词:磁珠法血液DNA提取试剂盒,WE0208,MagBeads Blood DNA Extraction Kit

    L-焦谷*酸 Triacontanol 98-79-3
    N-羟yi基乙二*(代"胺")-N,N′,N′-三乙酸 Biuret 150-39-0
    PY08-065  0.1%蛋白胨水 225ml  20瓶/箱,用于样品的稀释液
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    肌红蛋白 2,6-Dichloroindophenol 100684-32-0
    CYB165010 HRP标记生物素
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    尿酸* 6-BA 1198-77-2
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