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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
MagBeads Blood DNA Extraction Kit
- 库存:
405
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌是高品质的DNA纯化产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多磁珠法血液DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌
产地:国产|进口
英文名:MagBeads Blood DNA Extraction Kit
品牌:百奥莱博
编号:WE0208
规格:96次
本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的血液DNA提取方法,适用于从新鲜或冷冻抗凝血(柠檬酸盐、EDTA、肝素处理过的血液样品)中提取血液DNA。在离液盐存在时,DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。经两步漂洗以及一步快速漂洗(MW3的快速漂洗对于提高DNA纯度有很大帮助)后,高纯度的DNA被洗脱于EB或去离子水中。DNA得率与样品的类型,储存条件、时间以及样品中白细胞的含量有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(260/280的比值在1.7-1.9之间,260/230的比值大于1.5),完整度高(最高可达50 kb),可用于克隆,定量PCR,芯片测序等下游反应。
试剂盒组成:
| 组份 | 96次 |
| Buffer ML | 24ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 80ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 50ml |
| Buffer EB | 30ml |
| 蛋白酶K | 2×25mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 2×1.25ml |
| Magbeads PN | 1ml |
自备仪器及试剂:
1、手动单管操提取:
1)恒温混匀仪
2)2/15ml磁力架
3)异丙醇、无水乙醇
2、手动96孔深孔板提取:
1)恒温混匀仪
2)废液抽吸系统
3)手动连续分液器
4)电动连续分液器
5)手动连续分液器分液管(25ml)
6)96孔深孔板磁力架
7)异丙醇、无水乙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、异丙醇与Magbeads混合物的制备(以制备提取10个样品所需量为例)
1)向合适容量(加入异丙醇和Magbeads后总体积小于离心管容积的2/3)的离心管中加入3.3ml【0.3×(10+1)=3.3】的异丙醇。
注意:如用移液器加入异丙醇,需用移液器将枪头在异丙醇吹吸两次后再缓慢吸取异丙醇。
2)向上一步的离心管中加入220μl【20×(10+1)=220】Magbeads
注意:Magbeads加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀,异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡20秒钟使其成为均一的溶液。
3)异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡10秒钟使其成为均一的溶液。
3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
4、样品应避免反复冻融,否则会导致提取得到的DNA片段较小且提取得率低。
5、次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
6、如Buffer ML中出现沉淀,请在56℃水浴锅中重新溶解,摇匀后即可使用。
7、实验过程中,磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异,实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象,请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。
操作步骤:
一、手动单管操作:
1、向1.5ml的离心管中加入20μl 蛋白酶K ,之后加入200μl的血液。
注意:
1)冷冻抗凝血液需提前在室温(15~30℃)下放置,融化混匀。
2)如血液体积大于或小于200μl,蛋白酶K 、Buffer ML和异丙醇与磁珠混合物的用量需按比例调整。
2、向离心管中加入200μl Buffer ML,涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后,将离心管放于56℃水浴锅中孵育15分钟,期间涡旋震荡混匀2次。
3、将离心管从水浴锅中取出,短暂离心后室温放置5分钟。加入彻底混匀的320μl异丙醇与Magbeads混合物,涡旋震荡混匀5秒钟后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀
仪上震荡混匀5分钟或将离心管连续颠倒混匀10分钟。
4、将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
5、将离心管从磁力架上取下,加入750 ul Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、重复步骤5。
7、将离心管从磁力架上取下,加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、保持离心管固定于磁力架上,用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液,之后室温放置5-10分钟,使乙醇挥发干净。
注意:如果离心管侧壁上有液珠,可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上),之后彻底弃去无水乙醇。
10、将离心管从磁力架上取下,加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟,或将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟,期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
二、手动96孔板操作:
1、向2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入20μl 蛋白酶K ,之后加入200μl血液,并记录每孔中所加血液名称。
注意:
1)可将蛋白酶K 预先分装于8连管中,每管加入260μl。之后,用8通道移液器将蛋白酶K 分装于96孔深孔板中。
2)血液需加到96孔深孔板的底部,避免血液触碰到孔的上部。
2.向深孔板中用电动连续分液器或8通道移液器加入200μl Buffer ML。
3.将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟,盖上硅胶盖后将深孔板放于56℃水浴锅中孵育15分钟,之后再将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪上取下,用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入彻底混匀的320μl Magbeads与异丙醇混合物。盖上硅胶盖后,立即将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
5、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
注意:用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值,使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
7、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
8、重复步骤6-7。
9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
10、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
11、重复步骤9-10。
12、用手动连续分液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇,之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
13、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上,将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
15、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入100-200μl Buffer EB,之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热,洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
16、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟,用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。
储存条件:室温(15~30℃)
除北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌外,我公司正在打折促销以下产品:
BFD067 牛布病抗体检测卡
牛胆酸 Potassium stearate 81-25-4
DL-丝*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Hyaluronidase 5619-04-5
B0901 狗血清(辐照灭菌)
L-高*丙*酸乙酯盐*(代"酸")盐 TBPB 90891-21-7
F030228 HRP标记兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG*HRP
茴香霉素 Congo red 22862-76-6
ARB13740 兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶标法分析 Rabbit granulocyte colony stimulating factor,g-csf ELISA KIT
ARB13878 猪白介素5(IL-5)Elisa分析 Porcine interleukin 5,IL-5 ELISA KIT
BTN130597 萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒 Firefly Luciferase Assay Kit
BL0919 RBITC标记兔抗人IgA抗体
ARB13900 猪血栓调节蛋白(TM)血清中含量检测 Porcine thrombomodulin,tm ELISA KIT
ARB11735 人强啡肽(Dyn)酶免分析 Human dynorphin,dyn ELISA KIT
硫*(代"酸")亚锡 Pepstatin A 7488-55-3
DP103 质粒小提试剂盒
ARB12240 大鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)酶联免疫定量检测 Rat vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,vegfr-1/flt1 ELISA KIT
冈田酸*盐 CIAP 209266-80-8
F030805 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG*BIOTIN
北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌关键词:磁珠法血液DNA提取试剂盒,WE0208,MagBeads Blood DNA Extraction Kit
·Pfu DNA Polymerase
编号:WE0107
英文名称:Pfu DNA Polymerase
规格:500U
Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性,因此在DNA扩增过程中具有纠错能力,是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性,对于高GC含量模板,提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基,不能直接用于T/A克隆,如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。
产品组成:
| 组份 | 500U |
| Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml |
注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。
活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一个月,无明显活性改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:
1)用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物,所以应先加dNTP后,再加Pfu酶到反应体系中,并立即进行PCR反应。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低,延伸时间根据所扩增片段大小设定,本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性,PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆,如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌关键词:磁珠法血液DNA提取试剂盒,WE0208,MagBeads Blood DNA Extraction Kit
L-焦谷*酸 Triacontanol 98-79-3
N-羟yi基乙二*(代"胺")-N,N′,N′-三乙酸 Biuret 150-39-0
PY08-065 0.1%蛋白胨水 225ml 20瓶/箱,用于样品的稀释液
1404-93-9 Vancomycin 盐*(代"酸")万古霉素
肌红蛋白 2,6-Dichloroindophenol 100684-32-0
CYB165010 HRP标记生物素
BL1416 "Western blotting(山羊IgG)
BL0985 Carrageenan 卡拉胶
B0701 绵羊血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
尿酸* 6-BA 1198-77-2
NF-255 冻干抗C反应蛋白(CRP)血清
RN1401 RNAclean RNA 清洁纯化试剂盒
ARB10965 人免疫球蛋白A(IgA)含量检测 Human immunoglobulin a,IgA ELISA KIT
BFD041 黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒
ARB10510 人白细胞介素22(IL-22)含量测试 Human interleukin 22,IL-22 ELISA KIT
甘露低聚糖 γ-Linolenic acid
BL1192 姬姆萨染色液(工作液)
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购北京现货磁珠法血液DNA提取试剂盒品牌。
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文献和实验上非常昂贵,有的更要求昂贵的工作站成本。一般的科研单位院所也无法承受。 溶液型解决方案: 另外一种商品化解决方案是北京艾德莱生物的改良的Puregene纯化DNA,无需蛋白酶K消化,并且确保手工操作时间最小化。流程提供方便的实验 终止点,可暂时保存部分纯化的样品,安全可靠。该方法几个显著优点: 1. 首先该方法采取和世界著名品牌Qiagen、Promega、Roche相同的原理和配方研制而成,不需要复杂的实验设备,也不用有毒的苯酚,氯仿,和昂贵的蛋白酶K消化,操作也非常快捷
柱(DP1801)的提取纯度高一些,但是处理量小(0.1-1ml)、得率略低;溶液型 (DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上,一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和 进口差别的时候,很多人以为进口一定比国产的好,我们觉得没有最好,只有更好!在不断的进行试验优化之后,全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或 DP2201开创了第三代技术,不需要蛋白酶K消化,进口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用
作者:北京协和医院检验科 张时民 我们在观察红细胞形态时一般从大小、形态、色素含量和细胞内含物四个方面考虑。但某些时候他们会是交叉出现的,有时候同一种异常现象还会出现差异明显的两大细胞群体,这就是双相性细胞现象。许多专业书籍对此介绍不多,甚至没有,一些血液书中也没有详细提及,本文将对这一现象进行细致介绍。 所谓双相性红细胞(Biphasic red bloodcell),即外周血中出现两种形态的红细胞,包括大红细胞或者小红细胞、正常红细胞,低色素或正色素、高色素性红细胞。我们血涂片
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