酵母tRNA溶液(精提) 探针标记及检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")酵母tRNA溶液(精提) 探针标记及检测，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：酵母tRNA溶液(精提) 探针标记及检测
编号：BTN70904B
英文名：Yeast tRNA Solution
品牌：百奥莱博
本产品分A和B两个规格，浓度均为5mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母tRNA的原材料。B是精提液，是经过本公司柱式RNAadsorp纯化的分子生物学级别的酵母tRNA溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern杂交的封堵剂，对于探针为RNA的杂交试验尤其适用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA粗提液(BTN70904A)为材料，酚法制备tRNA精提液(BTN70904B)
1.在1倍体积的tRNA粗提液中加入一倍体积的自备Tris饱和酚，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
2.在上清中再加入一倍体积的自备Tris饱和酚和0.2倍体积自备的*仿，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4次抽提。
4.在上清中加入0.1倍体积的自备3M NaAc(pH5.2)和2倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL自备 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自备的DEPC水中，UV测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。
注意：tRNA比较短，又是单链，所以电泳时结合EB等染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式RNAadsorp精提，详细过程见该产品使用说明书。

二：tRNA精提液(BTN70904B)作为核酸助沉剂
1.在核酸(DNA或/和RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

 

盐	终浓度
NH4OAc(醋酸铵)	0.5M
NaCl(*化*)	0.25M
NaOAc(醋酸*)	0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20μg/mL，混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。
4. 冰上放置15分钟。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注：由于tRNA是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的DNA或RNA要用于此类反应，就不能使用tRNA作为助沉剂。如果回收的RNA要用于RT-PCR，使用tRNA可能会对反应的特异性产生干扰。

三：tRNA精提液(BTN70904B)作为杂交封堵剂
本产品可以作为原位杂交、Northern杂交和RNA斑点杂交的封堵剂，也可以作为Southern杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。
如果使用RNA探针，最好使用本产品做封堵剂，以保护RNA探针。

更多有关酵母tRNA溶液(精提) 探针标记及检测的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·酸洗玻璃珠(100μm)
编号：BTN100307A
英文名称：Acid-Washed Glassbeads(100μm)
规格：10g
本品是用浓酸充分洗涤后的玻璃珠，它是玻璃珠法破碎细菌和真菌的必备成分，主要用于从具有坚硬外壁的微生物细胞(如真菌孢子、酵母细胞、结核细胞等)中提取DNA、RNA和蛋白质大分子，因为用其他方法，包括酶解方法都很难沉底破碎具有坚硬外壁的微生物细胞。

产品特点：
1. 经过充分的酸洗，免去用户接触具有腐蚀性的浓酸。
2. 用本产品破碎具有坚硬外壁的微生物细胞，属于物理方法，不但比温和的化学破壁法普适性更好、重复性更好，同时不需要使用酶，因此不容易被酶中的外源核酸或蛋白质污染。
3. 用玻璃珠破碎法提取一个样品只需要10余分钟时间，非常快捷。注意：本产品需要跟本公司提供的裂解液、上柱液、离心吸附柱等配合使用才能用于核酸纯化。
4.一次可以处理5mL的微生物样品。
5. 本系列产品有各种规格、适用于不同材料。具体请参考下表：

编号	玻璃珠直径	最适用途
BTN100307A	100μm	作为超声破碎细菌时的添加物
BTN100307B	200μm	破碎细菌
BTN100307C	400μm	破碎酵母(如酿酒酵母)
BTN100307D	800μm	破碎霉菌、孢子等

储存条件：常温运输及保存，保存期为两年。

使用方法：
以我公司玻璃珠法柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN100303)为例：离心收集1-5mL过夜培养的真菌细胞，加入0.5mL溶液A和体积相当于0.5mL的、直径为400μm玻璃珠(大约0.5克)，振荡器上以最高速度振荡10分钟，，再加入0.5mL溶液B，震荡2分钟，2000rpm离心2分钟，在上清中加入3倍体积的溶液C，上柱，用通用洗涤液洗两次，干甩一次，最后用50-100μL DNA洗脱液洗脱基因组DNA待用。

使用效果：

图注：使用本产品C型(BTN100307C)提取3mL过夜培养的毕赤酵母菌液，最后用50μl DNA洗脱液洗脱，5μl用于琼脂糖电泳。电压300V，电泳时间5分钟，染料为绿如蓝，缓冲液为SuperBuffer。


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·牛血清白蛋白封堵液
编号：BTN131236
英文名称：BSA Blocking Solution
规格：250mL
本产品可用于所有封闭应用，包含A型Blocker BSA in PBS(10×)和B型Blocker BSA in TBS(10×)。

产品特点：
1．10%高质量牛血清白蛋白溶液。
2．浓缩工艺节省存储空间。
3．液体浓缩液稀释后即可使用，无须等待粉末的溶解。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·亲和素
编号：BTN131085
英文名称：Avidin
规格：10mg
本产品为母鸡卵清糖蛋白冻干粉末，亲和纯化，脱盐处理。它结合能力为11-15μg生物素/mg亲和素，等电点10～10.5，在很宽的pH和温度范围稳定。

产品应用：
➤作为与生物素化的酶结合或用于标记酶的免疫分析试剂。
➤作为富含生物素组织切片的封闭蛋白(使用0.1%来抑制内源生物素)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·单细胞全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100938
英文名称：Single Cell Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品是用于从单细胞(或数个细胞)中制备和扩增全基因组的试剂盒，它是整合单细胞裂解液和全基因组扩增试剂盒而成。

产品特点：
1． 即开即用，不需要单独准备所需试剂。
2．可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。
3． 具有全基因组扩增的所有特点，包括高产量和高保真性。
4．可使用各种来源的样品，包括培养细胞和胚胎细胞等。
5．产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异，微卫星差异、SNP、STR)等。

试剂盒组成：

成分	规格
单细胞裂解液A	100μl
单细胞裂解液B	100μl
单细胞专用WGA Mix	0.3ml
Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将细胞悬浮在自备的PBS缓冲液或其他合适的缓冲液中，在显微镜下用毛细管转移单个细胞(或数个细胞，总体积不超过2.5μL)到含有2.5μl单细胞裂解液A的0.2mL PCR管中，室温放置2分钟。如果使用纯化好的DNA溶液，则直接将2.5μl的DNA溶液和2.5μl的单细胞裂解液A混合，室温放置2分钟。
2. 加入5μl 单细胞裂解液B，95℃保温5分钟，室温短暂离心半分钟。
3. 然后冰上放置5-10分钟。
4. 加入10μl 单细胞专用WGA Mix，轻柔吹打混合均匀。
5. 加入0.5μl Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
6. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入30-50μl石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
7. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
8. 立即取3-5μl WGA反应液进行电泳检测扩增效果。
 注意：WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料，所以需要先加上样缓冲液。
9.扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。


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