北京生物素化的辣根过氧化物酶现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京生物素化的辣根过氧化物酶现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京生物素化的辣根过氧化物酶现货
规格：5mg
英文名：Biotin-HRP
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品为生物素标记的辣根过氧化物酶，其灵敏性高，推荐用于利用亲和素、链亲和素或中性亲和素蛋白的三明治技术。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性单位定义：一个单位定义为在20℃，20秒内从联*(代"*")三酚中产生1μmol焦酚所需的生物素化辣根过氧化物酶的量。

我公司的北京生物素化的辣根过氧化物酶现货，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·福林酚试剂
编号：BTN100939
英文名称：Folin Phenol Reagent
规格：100mL
福林酚试剂又叫Folin-Ciocalteau酚试剂，其本身并不含酚，而是磷钼酸和磷钨酸混合物，它是由美国科学家Folin和Ciocalteau在1929年发明，主要用于检测含酚成分。后被Lowry用于蛋白定量，现主要作为Lowry蛋白定量法的成分使用。
注：福林酚试剂跟福林试剂不同，后者是1,2-*醌-4-磺酸*。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·动物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111207B
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。


北京生物素化的辣根过氧化物酶现货关键词：Biotin-HRP,生物素化的辣根过氧化物酶,BTN131095


·植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)
编号：BTN81218
英文名称：Plant Total Protein Miniprep Kit (SDS-PAGE)
规格：30次
本产品用于快速提取微量植物蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。

产品特点：
1.可以处理各种植物材料，包括新鲜或冻干的材料。
2. 操作简单。
3. 能有效去除植物样品中常见的污染。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	240ml
溶液C	1.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1．称取植物样品。如果是冰冻干燥的样品，称取50mg。如果是新鲜组织样品，称取100mg。在液氮条件下，用研钵充分研磨成为粉末。
2．将研磨得到的粉末转移到1.5mL的塑料离心管中。
3．加入1mL溶液A，在震荡仪上充分震荡5分钟。
4．室温12000g离心5分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5．将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中，在沸水中处理3分钟。
6．冷却至室温后，转移到一个10-15mL塑料离心管中，加入8倍体积的-20℃预冷的溶液B。
7．颠倒混匀后，置于-20℃冰箱中至少60分钟以充分沉淀其中的蛋白质。
8．12000g离心15分钟，去上清液，保留蛋白沉淀。
9．室温晾干之后，加入50μL溶液C并在震荡仪上充分震荡以让蛋白沉淀充分溶解
10．将蛋白溶液在沸水中处理3分钟。
11．室温12000g离心5分钟，上清可以直接用于蛋白浓度测定和SDS-PAGE。



北京生物素化的辣根过氧化物酶现货关键词：Biotin-HRP,生物素化的辣根过氧化物酶,BTN131095


·长效期SDS-PAGE还原剂
编号：BTN100910
英文名称：SDS-PAGE Reducing Agent
规格：10mL
在蛋白质PAGE电泳中，还原剂的作用是打断二硫键，可以使蛋白质变性。但是在常规的SDS-PAGE中只有上样液中含有还原剂，PAGE胶中并没有还原剂，蛋白质会在电泳过程中重新形成二硫键，因此电泳条带不清晰。本产品可以克服蛋白电泳此缺点。将本品加入到电泳液中，使蛋白在电泳过程中无法重新形成二硫键。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·农杆菌EHA101感受态细胞
编号：BTN161205
英文名称：E.coli EHA101 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因，vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

 本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101农杆菌的基因型是：C58(rifR)TipEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR)Nopaline。

产品组成：

成分	规格
EHA101 农杆菌感受态细胞	0.1ml×10
pKWGF2(10ng/uL)	10μl
说明书	1份

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等。

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μL感受态加1μg(体积不大于10μL)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB 平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。

注意事项：
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3、平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4、利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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