PreScissiom蛋白酶 工具酶

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百奥莱博专业生产销*(代"售")PreScissiom蛋白酶 工具酶，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：PreScissiom蛋白酶 工具酶
品牌：百奥莱博
编号：BTN130876
英文名：PreScissiom Protease
规格：100U
产地：国产|进口
PreScission蛋白酶是一种由人鼻病毒14型的3C蛋白酶和谷胱甘肽S-转移酶(GST)组成的融合蛋白。这种蛋白酶特异识别短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln/Gly-Pro中的Gln和Gly残基而进行切割，底物的识别和切割不仅依赖于融合蛋白的一级结构还依赖于融合蛋白的二级和三级结构。它可以特异性的将pGEX-6P系列等载体表达出的带有酶底物识别多肽序列融合蛋白的GST标签进行分离。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在5℃条件下反应16小时，能够切割100μg的GST标签的融合蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。

更多有关PreScissiom蛋白酶 工具酶的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·可保种型蓝白T载体
编号：BTN60803
英文名称：Blue-White Vector T
规格：50 ng
本产品是环状的可以制备Clion蓝白T载体的质粒DNA。T载体是克隆PCR扩增产物的必不可少的工具，但是由于市场上的各种T载体质量参差不齐，用户很难购买到满意的产品；同时购买的T载体为线性DNA，不能保种，必须反复购买，累计成本很高。为解决这一问题，我司特推出可保种型T载体，用户只需要购买Xcm I内切酶就可以自己制备高质量的T载体，随用随配，十分方便。

产品特点：
1.一次购买，终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA，可以象其他质粒一样保种并长期保存。
2. 随用随配，十分方便。用户只需要提供Xcm I 限制性内切酶和基本分子生物学实验条件，就可以自己制备T载体。整个过程只需要两天。
3. T载体含T 率为100%。本方法不是使用传统的加尾法，而是使用Xcm I酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段长为1.3 Kb的Xcm I DNA片段,经Xcm I酶切后回收得到的质粒DNA(T载体)两端自然全部带有T 突出，比例远远高于用Taq DNA聚合酶加尾法和TdT 加尾法得到的T载体。
4. 方便各种下游操作。用本产品得到的蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的酶切位点，便于后续克隆； Xcm I 位点在Alpha 互补区，可以使用蓝白斑筛选重组子；两边还有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于制备RNA探针。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一.细菌的转化
1. 将100μl感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用end A1菌种(如DH1、DH5、DH5、JM109、XL1-Blue等。常用宿主细菌的基因型可以参考《分子克隆手册》等参考书)。因为这类细菌所含DNase少，制备T载体后，残留的DNase对的T末端的破坏机会更小。
2. 取5-10μl本产品加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2分钟。
4. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时。
5. 取100μl培养液涂布到含Amp的LB琼脂平板表面。
6. 将平板置于室温直至液体被吸收。
7. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。

二.细菌的鉴定
1. 挑取单个菌落进行过夜细菌培养。
2. 按常规的方法进行质粒小量制备。
3. 用Xcm I内切酶按下面条件酶切提取的质粒DNA，如果大规模酶切，需要按比例增加各成分用量:

 

成分	使用量
Xcm I Buffer,10×	5μl
质粒DNA	<或= 2μg
Xcm I	1μl
超纯水	加到50μl

 37℃保温一小时，65℃保温20分钟使酶失活。
4.电泳，本产品被Xcm I酶切后将产生3 Kb和1.3 Kb的两段DNA。
5. 如果Xcm I酶切图谱正确，则按常规的方法进行细菌的保种。

三. T载体的制备
1. 参考《分子克隆手册》等参考书培养细菌和提取质粒DNA。注意：一定要去尽可能去除残留的RNA和蛋白质(含残留DNase)的污染。
2. 用Xcm I酶切质粒。注意：酶切时间最好不要超过一小时，避免残留的DNase对T末端的破坏。
3.电泳后切下含3Kb DNA(既蓝白T载体)的胶段。注意：千万不要用UV照射将要回收的片段，因为UV会使DNA交连，使DNA失去转化细菌的能力。如果酶切的DNA量大，可以使用百奥莱博绿如蓝核酸染料,可以直接在可见光和黑背景下切胶。如果别无选择，最好在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免DNA交连，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)
4. 用常规DNA回收方法进行胶回收。
5. 测定T载体DNA的浓度后，将T载体DNA保存在-20℃备用或直接使用。

四.连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	阴性对照管
T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl
蓝白T载体	20-50ng	20-50ng
PCR 纯化产物	50-500ng	不加
T4 Ligase	3-5U	3-5U
补水到	10μl	10μl

注意: PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3:1-10:1。
3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的操作说明书进行连接)。

五.细菌转化和鉴定
1. 取5μl连接产物进行转化，具体步骤见本手册一，最好使用含X-gal、IPTG、Amp的LB琼脂平板以便进行蓝白筛选。
2. 按经典的质粒提取+酶切或测序鉴定，可以选用的、在插入位点两侧都有酶切位点的酶有BstZ I、EcoR I和Not I。可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。按菌落PCR方法筛选，可选用百奥莱博的菌落PCR试剂盒(BTN50901)进行快速筛选，需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。

MCS位点：



PreScissiom蛋白酶 工具酶关键词：BTN130876,PreScissiom蛋白酶,PreScissiom Protease


·Bsu DNA聚合酶，大片段
编号：BTN130616
英文名称：Bsu DNA Polymerase，Large Fragment
规格：200U
Bsu DNA聚合酶大片段保留了Bacillus subtilis DNA聚合酶I的5´→3´聚合酶活性，但是缺失了5´→3´外切酶结构域。大片段缺乏3´→5´外切酶活性。

产品用途：
1．DNA等温扩增；
2．引物延伸；
3．80℃ 20分钟即可失活；
4．建议反应温度不要超过70℃，不能用于热循环测序或PCR。

产品组成：

成分	规格
Bsu DNA聚合酶，大片段，5000U/mL	0.04ml
反应Buffer，10×	1.25ml
说明书	1份

活性单位定义：1单位指37℃条件下，30分钟内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

储存Buffer：25mM Tris-HCl(pH7.4)，50mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol。

反应条件：1×Buffer[10mM Tris-HCl，50mM NaCl，10mM MgCl2，1mM DTT(pH7.9 @ 25℃)]。加入33μm dNTPs(不随酶提供)，37℃孵育。

灭活：75℃ 20分钟。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

备注：
1．由于缺乏3´→5´核酸外切酶活性，Bsu DNA聚合酶大片段不能切除3´未配对的突出末端，因而不适用于生成平滑末端；
2．25℃时，Bsu DNA聚合酶，大片段保留50%的活性，是同温度下Klenow片段(3´→5´exo–)的两倍。


PreScissiom蛋白酶 工具酶关键词：BTN130876,PreScissiom蛋白酶,PreScissiom Protease

SJ0543 Sepharose CL-4B
N-乙酰-L-谷*酸 5-Hydroxymethylfurfural 1188-37-0
SJ0356 Inositol   肌醇
*化硝基四氮唑蓝 Dimedone 298-83-*(代"9")
ARB13979 猪凋亡相关因子(FAS/CD95)代做ELISA实验 Porcine factor-related apoptosis,fas ELISA KIT
F030211 HRP标记山羊抗小鼠IgA抗体 Goat Anti-Mouse IgA*HRP
ARB13139 小鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)血清中含量检测 Mouse prostatic acid phosphatase,pap ELISA KIT
冈田酸 Poly A 78111-17-8
β-丙*酸 3-Nitrobenzaldehyde 107-95-9
玫瑰红三羧酸铵 Indoxyl-Glucoside 569-58-4
F030637 FITC标记山羊抗人IgG FC抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*FITC
67-42-5 EGTA  乙二醇－双－(2－*基乙基)四乙酸
ARB10360 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)Elisa分析 Human heart fatty acid binding protein,h-fabp ELISA KIT
CYB166010-D 羊抗人IgM(μ链特异)-GOLD
BTN130542 水蛭素溶液 Hirudin Solution
BTN130567 β-Tubulin小鼠单抗 β-Tubulin Mouse Mab
ARB12765 小鼠L选择素(L-SelectIn/CD62L)含量检测 Mouse l-selectin ELISA KIT
葡聚糖凝胶G-200 VB5
ARB14262 猪核因子kb(NFkb)含量测试 
ARB11402 人神经*酸酶(NA)含量检测 Human neuraminidase,na ELISA KIT
PY02-122  *化*结晶紫增菌液  250克  

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