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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输、4℃保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Blood DNA column extraction kit
- 库存:
523
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
BTN60306型柱式血液DNA提取试剂盒厂家是高品质的DNA纯化产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多柱式血液DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:BTN60306型柱式血液DNA提取试剂盒厂家
英文名:Blood DNA column extraction kit
品牌:百奥莱博
编号:BTN60306
产地:国产|进口
本试剂盒是基于离心柱/硅胶膜原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。
产品特点:
1. DNA纯净,OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2.产量高,一般为1-10μg/mL全血(对哺乳动物血液)。
3. 操作简单,整个过程约20分钟,全室温操作,适合大规模样品处理。
4. 用量广泛,每次可以处理少达20μl(对禽类动物血液),多达1mL的血液(对哺乳动物血液)。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 红细胞裂解液(A型) | 25ml |
| 溶液A | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在0.02-1mL新鲜或抗凝血液(冷冻血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL红细胞裂解液(A型),吹打混匀。
a)哺乳动物,血液使用量以300μl以下为宜,使用量越大产量越高,但产率会降低。如果血液多于300μl,重复1-2步两次可以提高产率。
b)禽类动物,血液使用量以20μl以下为宜,可以从第3步做起。
2.室温12000~15000rpm离心5分钟,沉淀呈粉红色,小心倾去上清。
3. 再短暂离心半分钟,吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解,但一般可以省略。
4. 向有沉淀的离心管内加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶体沉淀,用前需要摇晃均匀),用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞,释放DNA,所以吹打越充分越好。
5. 静置2分钟待溶液变清亮后,将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合。
6. 12000rpm离心半分钟,DNA将吸附到膜上,弃收集管中的废液。
7. 加入0.7mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
8. 加入0.3mL的通用洗柱液,12000rpm离心半分钟,弃收集管中的废液。
9. 12000rpm离心半分钟,甩干残留液体。此步很重要,以去除膜上残留通用洗柱液,否则会影响后续反应。
10. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入适量50μl DNA洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果会更好。
11. 12000rpm离心半分钟,离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。
除BTN60306型柱式血液DNA提取试剂盒厂家外,我公司正在打折促销以下产品:
·组织培养专用蛋白酶抑制剂
编号:BTN130531
英文名称:Protease Inhibitor for Tissue Culture
规格:1mL
本产品就是混合各种蛋白酶抑制剂而得的200×浓缩液,溶剂为DMSO。组织培养时,各种分泌蛋白会不同程度的被各种外源和内源性蛋白酶降解。为防止分泌蛋白的降解,需要在培养基中添加各种蛋白酶抑制剂。
产品特点:
1. 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
2. 抑制谱广,由多种蛋白酶抑制剂组成,能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶及*基肽酶等各种蛋白酶活性。
3. 它可以与各种组织培养基兼容,在培养基中加入1/200体积即可。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期两年。
·一站式DNA非变性PAGE电泳套装
编号:BTN100205
英文名称:One-Stop DNA Native PAGE Pack
规格:30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段,因为在非变性PAGE中,DNA的迁移率除跟长短相关外,还跟其构象和结合的蛋白质相关。
产品特点:
1.一站式,用户只需要准备水和样品,十分方便。
2. 安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
3. 灵活,高浓度的丙*(代"烯")酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶,分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。
产品组成:
| 成分 | 规格 | 保存 |
| 丙*(代"烯")酰胺 | 60g | 室温 |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺 | 2g | 室温 |
| TEMED | 1.5ml | 4℃,避光 |
| 过硫*(代"酸")铵(干粉) | 1g | 室温 |
| 非变性PAGE上样液,2× | 1ml | 4℃ |
| 10×TBE(BTN90313) | 250ml | 室温 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,保存条件见上表,有效期一年。
使用方法:
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)
一、PAGE浓度的选择:最好使用浓度为5-12%的丙*(代"烯")酰胺胶,因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间,而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。
二、PAGE交联度的选择:交联度越低,孔径越大,对DNA分子构象的变化越灵敏,SSCP分辨率越高,但过低则胶太软,不好进行电泳后的后续操作,所以一般选择1-2%的交联度(即丙*(代"烯")酰胺:甲叉双丙*(代"烯")酰胺在49:1到48:2之间)。
三、体积的选择:SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板,可以结合梳子的厚度,计算胶的体积。
操作:
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量,配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A:新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B:新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液,下同):在本产品提供的装有60 g丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟),即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完,必须4℃避光保存。
C:配SSCP PAGE胶:在一个250mL的三角瓶中,先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
| PAGE胶浓度 | 各成分用量(单位:ml) | 总体积(ml) | ||
| 去离子水 | 30%AB溶液 | 10×TBE缓冲液 | ||
| 5% | 73.4 | 16.6 | 10.0 | 100 |
| 6% | 70.0 | 20.0 | 10.0 | 100 |
| 7% | 66.7 | 23.3 | 10.0 | 100 |
| 8% | 63.3 | 26.7 | 10.0 | 100 |
| 9% | 60.0 | 30.0 | 10.0 | 100 |
| 10% | 56.7 | 33.3 | 10.0 | 100 |
| 11% | 53.3 | 36.7 | 10.0 | 100 |
| 12% | 50.0 | 40.0 | 10.0 | 100 |
注:有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油,则减少去离子水的用量10mL,同时加入10mL甘油。
D:摇晃混匀。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应),无条件也可以不脱氧。
E:加入500μL 10%APS和100μL TEMED,迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子,用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩,最好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品,加入等体积2×非变性PAGE上样液,85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线,打开电源开关。如果PAGE中不含甘油,则使用25W的功率,电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE,则使用8W的功率,电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型,所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的PAGE,最好恒温在4℃、对含甘油的PAGE,最好恒温在25℃。
5. 终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。
疑难解答:
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带?
原因之一:可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二:可能是PCR产物用量过高,彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率?
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%),因为甘油是弱变性剂,能部分展开DNA折叠结构,增加表面积,增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大,电泳速度变慢,因此只适合室温电泳使用,不要4℃电泳。如果条件允许,最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。
BTN60306型柱式血液DNA提取试剂盒厂家关键词:柱式血液DNA提取试剂盒,Blood DNA column extraction kit,BTN60306
·动态浊度法内毒素定量试剂盒
编号:BTN131204
英文名称:Eendotoxin Quantification Kit(Dynamic turbidity method)
规格:1.7×10支
鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C 因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。随着凝胶的形成,反应液的吸光度(OD值,浊度)增加,OD值增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之,OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关,启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系,据此,可以定量供试品的内毒素浓度。本试剂盒的检测限为0.01 EU/mL~10 EU/mL。
储存条件:低温运输,低温运输,4℃避光保存,有效期两年。
自备试剂:细菌内毒素标准品(BTN140405)、无内毒素水(BTN130502)(可从本公司另购)
使用方法:
一、设备准备
除热原试管、除热原吸头、除热原加样槽、除热原96孔微板。
旋涡混合器、移液器、多道移液器、试管架。
带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件,例如,微板鲎试仪ELx808及软件TALgent或Gen5。
二、实验操作
1.动态光度测定仪器的设定,以微板鲎试仪ELx808为例:
a)预热仪器,设置温育温度为37ºC。
b)设置模板及程序:设定读板波长为630nm,设定动力学参数:读板120分钟,每30秒读一次。
2.内毒素标准溶液配制:
a)标准曲线所采用的内毒素浓度可以为2至10倍稀释的系列(如0.5,0.25,0.125,0.0625 EU/mL或10,1,0.1,0.01 EU/mL)。
b)取自备的细菌内毒素标准品1支,用砂轮沿安瓿颈部划痕,开启,加入适量(建议在0.5mL- 1.2mL之间)自备的无内毒素水,置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。
c)将上述内毒素溶液进一步用自备的无内毒素水稀释成所需浓度,每稀释一步均应在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟。(稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟,放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。)
3. 阴性对照为无内毒素水。
4. 鲎试剂的溶解:按标示量加无内毒素水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要用旋涡混合器剧烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内使用。若采用多道移液器,将溶解的鲎试剂转移到除热原加样槽,并轻轻摇匀。
5.在微板鲎试仪ELx808上操作:
a)取除热原微板,在各孔中分别加入100μl无内毒素水、内毒素标准溶液,或供试品。
b)将微板放置于鲎试仪中,37ºC温育10分钟。
c)温育结束后,用移液器或多道移液器加入100μl鲎试剂(避免产生气泡),中速振摇10秒混匀,在630nm波长处,每30-60秒读一次,读板120分钟。
三、数据处理
设定启动OD(可以设为0.02,一般可以在0.02到0.04之间),软件自动给出其启动时间(T)。
建立标准曲线:lgT = b lgC + a,其中T为启动时间,C为内毒素的浓度,b为直线斜率,a为Y轴截距。
当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效:
a)标准曲线的浓度点≥4,标准曲线的相关系数r≤-0.980。
b)标准曲线最低点的T值小于阴性对照的T值。
c)供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。
注意事项:
1. 该试剂盒用于体外细菌内毒素的定量检测,严禁试剂以任何途径进入机体。
2. 接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。试验过程应防止微生物的污染。该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。
3. 供试品的pH值应在6.0–8.0之间,若超出此范围,需用除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。
4. 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时,须进行干扰试验,参见供试品的干扰试验。
供试品的干扰试验:
1. 当对新药或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时,必须进行干扰试验;
2. 当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变,或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,必须重新进行干扰试验;
3. 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时,须进行干扰试验。
步骤如下:
1. 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm),作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度,如采用标准曲线为10,1,0.1,0.01 EU/mL系列时,可以用供试品配制0.1 EU/mL内毒素浓度作为实验的供试品阳性对照。
2. 用供试品溶液配制浓度为λm的内毒素溶液(即含λm内毒素的供试品阳性对照),测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs;
3. 测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度,称为Ct;
4. 计算该试验条件下的回收率R=(Cs–Ct)/λm×100%;
5. 当R在50%~200%之间,则认为在此试验条件下供试品溶液不存在明显干扰作用;
6. 当R在50%~200%之外,需对供试品进行系列稀释或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤2-4,直到内毒素的回收率R在50%~200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。
BTN60306型柱式血液DNA提取试剂盒厂家关键词:柱式血液DNA提取试剂盒,Blood DNA column extraction kit,BTN60306
ARB13604 兔子转化生长因子β1(TGF-β1)含量测试 Rabbit transforming growth factor β1,tgf-β1 ELISA KIT
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辛基琼脂糖凝胶4FF Neuraminidase 68652-09-5
ARB11728 人游离蛋白S(FP-S)elisa检测 Human free protein s,fp-s ELISA KIT
A2207-56 猪血清Porcine Serum
磷酸腺嘌呤 OCBA 70700-30-0
2483-12-3 4*dNTPs
DL-丙*酸 Diphenylcarbinol 302-72-7
磷酸**铵 PK 7783-13-3
隐色结晶紫 L-Homoserine 603-48-5
低范围RNA Ladder UDPGA
罗丹宁 Basic Blue 26 141-84-4
藏红T Fluorescein disodiu*(代"m") salt 477-73-6
ARB10850 人抗胃壁细胞抗体(AGPA/PCA)Elisa方法检测 Human anti-gastric parietal cell antibody,agpa/pca ELISA KIT
001001 新生牛血清
BL1127 细胞爬片抗原修复液(1×)
PY01-174 结晶紫 BS 25克
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文献和实验【心得】关于全血的保存-DNA提取-pcr个人经验(经常在线回复)(血中rna提取在后边ps:5)(组织中提DNA ps6)
做了好多DNA提取保存,吃了很多亏给大家点建议吧:(有疑问可以回帖,有时间我会回答如果我知道) 血液保存:EDTA抗凝最好,肝素也可以不过经常会影响后续试验,一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少,再长时间我也没有试过,注意解冻一次大概损失20%左右(提取感觉估计得到的可能不准),放的时间长也会降解一些。4°做好不要太长3天我是试过没有问题再长不知道了血凝块就算了吧太难了结果不稳定呵呵如果要分离血浆请在把血冻起来之前,其实越早越好否则有时候会溶血
Gentra 公):是用沉淀法、方便简单,保存试剂时间长,DNA放在溶解液里边4°2年都没有问题,就是有点贵,非常好用。后边有个网友用了宝生物公司的DNA提取试剂盒也很好用,也很简单,我自已倒是没有用过,注意他的保存液体中有没有EDTA。总结:推荐后两个吧其他试剂盒没有用过,沉淀法300ul血可以做100次pcr,25ul体系,离心柱发法600ul血。 补充:解冻血稍微快一点好,例如37°解冻用蛋白酶k比试剂盒说明延长一点比较好。 提取好以后保存:比血液更保存的久,5年没有问题,不过估计天根可能会
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