北京现货大肠杆菌M15化学感受态细胞库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货大肠杆菌M15化学感受态细胞库存由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌M15化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货大肠杆菌M15化学感受态细胞库存
产地：国产|进口
规格：0.1mL*10
编号：BTN140429
 本产品是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。本产品具有卡那霉素抗性。
 菌株基因型为：lac ara gal mtl recA+ uvr+ [pREP4 lacI kanaR]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

更多有关北京现货大肠杆菌M15化学感受态细胞库存的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·核酸内切酶IV
编号：BTN130638
英文名称：Endonuclease IV
规格：1000U
核酸内切酶IV能够作用于DNA分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶，水解DNA上的完整AP位点，占E.coli AP酶总活性的10%。切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有3´二酯酶活性，能从DNA的3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。其反应原理图如下：


产品用途：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10⁴～1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

产品组成：

 

成分	规格
Endonuclease IV	100μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：85℃，20分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割 1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理 10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。


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SJ0333 Gelred
HC0168 双凹载玻片
BTN131092 生物素 Biotin
葡萄糖酸* Dimethylphosphinic acid 299-27-4
9006-59-1 卵清蛋白 Albumin  Egg
羟基脲 AgDDTC 127-07-1
3-(N-玛啡啉)-2-羟基丙磺酸*盐 Polygalacturonic acid sodiu*(代"m") salt 79803-73-9
BTN130521 链霉亲和素磁珠 Magnetic beads,Streptavidin
ARB12779 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA代测服务 Mouse α1-acid glycoprotein,α1-agp ELISA KIT
ARB10402 人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)含量测试 Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,strail ELISA KIT
2′-脱氧腺苷-5′-三磷酸二*盐 Penicillin&Streptomycin&Neomycin solution,γ-Irradiated 74299-50-6
ARB13345 牛β-羟基丁酸(Bhb)ELISA检测服务 
ARB12918 小鼠白细胞介素2(IL-2)Elisa定量检测 Mouse interleukin 2,IL-2 ELISA KIT
ARB13624 兔子前列腺素E2(PGE2)含量检测 Rabbit prostaglandin e2,pg-e2 ELISA KIT
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·终点显色法内毒素定量试剂盒
编号：BTN120415
英文名称：Chromogenic End-point TAL Kit
规格：32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎(TAL)的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子等跟凝血有关成分，当细菌内毒素激活C因子时会，起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基*(代"*")胺(pNA，λmax=405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以通过测定样品405nm的光吸收来用外标准法定量样品的内毒素浓度。其原理图如下(TAL和图中LAL相同)：

本试剂盒就是基于上述原理开发而成，并进行了重大改进，增加了偶氮化试剂染色硝基*(代"*")胺(pNA)的步骤，此步使得反应的最终颜色变成玫瑰红色(λmax = 545nm)，避免了深颜色样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰，结果更加准确可靠。

产品特点：
1.一站式，提供所需的试剂、内毒素对照和无热源的耗材，为用户省去繁琐的准备工作。
2. 灵敏度高，可以对浓度在0.1EU/mL-1EU/mL和在0.01EU/mL -0.1EU/mL两个浓度范围的内毒素样品进行定量。
3. 比经典的pNA法多一步偶氮化染色的步骤，处理样品的范围更广，结果更加稳定可靠。
4.样品中如含有β－葡聚糖，则需选用特异性显色基质鲎试剂盒，因为β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素检测。
5. 若样品含头孢类抗菌素或磺胺制剂，则需要选用不含偶氮化试剂的鲎试剂盒，因为上述成分也能跟本试剂盒中的偶氮染色剂发生偶联反应而干扰偶氮化显色。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌内毒素标准品 15EU	2支
鲎试剂	2支×1.7mL
显色基质	2支×1.7mL
偶氮化试剂1	2支×10mL
偶氮化试剂2	2支×10mL
偶氮化试剂3	2支×10mL
HCl(反应终止剂)	50ml
细菌内毒素检查用水	50ml×2瓶
除热原试管，10×75mm	10×5支
除热原吸头，1ml	10×4支
除热原吸头，0.2ml	10×5支
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期两年。

使用方法：

一、样品的预处理
1.若样品的本底在545nm的吸光度值大于0.5，必须对样品进行稀释后再检测。
2.若样品颜色较深(例如溶血)，或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质),必须设置样品空白管以扣除样品自身的颜色本底。样品空白管不加入鲎试剂，以等体积的细菌内毒素检查用水代替。其余操作同样品管。
3.本检测方法高度灵敏，故接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。实验过程应防止细菌的污染(内毒素即细菌的LPS)。
4.待测样品的pH值应在6.0–8.0之间，若超出此范围，需用自备的除热原的缓冲液、0.1M*氧化*或0.1M盐*(代"酸")调节。

二、试剂准备
5.细菌内毒素标准溶液配制(制备标准曲线用)：取细菌内毒素标准品1支，按细菌内毒素标准品使用说明(见附2)稀释为10EU/mL的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液，最后按下表以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液，在A-D四个离心管中稀释成0.1、0.25、0.5、1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。注意：也可以选择0.01、0.025、0.05、0.1EU/mL的浓度梯度。注意：标准品浓度范围不同，后续显色实验的保温时间也不同。

成份	A管	B管	C管	D管
细菌内毒素检查用水(mL)	0	0.5	0.75	0.9
1EU/ml内毒素溶液(mL)	1	0.5	0.25	0.1
内毒素浓度(EU/mL)	1	0.5	0.25	0.1

6.阴性对照用细菌内毒素检查用水。
7.配制鲎试剂、显色基质、偶氮化试剂等试剂的工作液。
(1)鲎试剂：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解，得鲎试剂工作液。注意不要用旋涡混匀剧烈振摇。鲎试剂工作液应在10分钟内用完。
(2)显色基质：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻振摇使显色基质完全溶解，得显色基质工作液。显色基质工作液可在无污染的条件下于4℃贮存8小时以内。
(3)偶氮化试剂1：按标签标示量加反应终止剂(注意：不是细菌内毒素检查用水)于偶氮化试剂1瓶中，得偶氮化试剂1工作液。
(4)偶氮化试剂2：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2瓶中，得偶氮化试剂2工作液。
(5)偶氮化试剂3：按标签标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3瓶中，得偶氮化试剂3工作液。偶氮化试剂工作液可于4℃贮存1周。

三、实验操作
8.取本试剂盒提供的无热原试管6管，按下表操作(每加一个试剂均需要充分混匀，或用移液器轻柔吹打混匀):NC为阴性对照，PC为阳性对照。

成份	NC 1管	PC 4管	样品 1管
细菌内毒素检查用水(μL)	100	-	-
内毒素标准溶液(μL)(4种)	-	每种分别100	-
待测样品(μL)	-	-	100
鲎试剂工作液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T1分钟
显色基质溶液(μL)	100	100	100
混匀，37ºC温育T2分钟
偶氮化试剂1工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂2工作液(μL)	500	500	500
偶氮化试剂3工作液(μL)	500	500	500
混匀,静置5分钟，于λ545nm测OD值

特别注意：每个批次的T1和T2不同。对本批次。

四、数据处理
9.建标准曲线：Y=bX + a，其中Y为545nm处吸光值，X为内毒素浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。
10.当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：
(1)标准曲线的相关系数r≥0.980，
(2)标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值，
(3)待测样品平行管的平均值在标准曲线的区间内。

附1：待测样品的干扰实验
当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时，须进行干扰实验。待测样品的干扰实验详见《中华人民共和国药典》2010细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰实验”。当鲎试剂、待测样品的来源、配方、生产工艺改变或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须进行干扰实验，步骤如下:
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度(设为λm)，作为待测样品干扰实验中添加的内毒素浓度，配制含λm内毒素的待测样品阳性对照，测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs；
2.测量出未添加外源内毒素的待测样品溶液内毒素浓度,称为Ct；
3.计算该实验条件下的回收率R＝(Cs–Ct)/λm×100%
4.当R在50%～200%之间，则认为在此实验条件下待测样品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%～200%之外，需对待测样品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效 稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%～200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。

附2：细菌内毒素标准品使用说明
本品为白色疏松海绵状固体，系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品，供鲎实验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和各种阳性对照。其用法如下：
6.溶解：加入适量的细菌内毒素检查用水(BET水，最大加入量不得超过1mL),复溶后置涡旋混匀器上混匀15 min。
7.稀释：将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成各个不同浓度。每次稀释后必须在涡旋混匀器上混匀至少一分钟。每一步的稀释倍数均不得超过10倍。
8.本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测，禁止用于注射、口服等。
9.实验所用的器皿需经过处理，以除去可能存在的外源性内毒素，可以经250℃干烤至少60分钟处理，也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
10.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。

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