北京柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)厂商

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)厂商，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)厂商
英文名：Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本试剂盒在柱式真菌DNA提取试剂盒(BTN70901)基础上改良而得大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。

产品特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g 各种真菌组织。
2. 纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA。
4.产率一般在10-100μg/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800μg。
5. DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	40ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	4套
通用洗柱液	200ml
DNA洗脱液2.0	5ml
酸洗玻璃珠，400μm	40g
说明书	1份

储存条件：常温运输,4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对菌液：取60-100mL 过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约1 g)，转移到装有20mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10 克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5. 加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7. 将20mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8. 重复上步操作一次。
9. 12000rpm 空甩1分钟去除残留液体。
10. 将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500μL DNA 洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12. 所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13. 注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min 代替12000rpm离心1-2min。

北京柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法)厂商正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒
编号：BTN160685-25A
英文名称：SuperTOPO Cloning Kit
规格：25次

·即用型高保真PCR试剂盒
编号：BTN90708
英文名称：Instant HiFi PCR MasterMix
规格：1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

试剂		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10-20pmol each
补水到		30μL

参考扩增条件：

预变性	94℃	4min
PCR(30个循环)	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事项：
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3´-5´外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR 仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA 克隆，可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5´到 3´外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。

疑难解答：
Q：为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3´-5´的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3´-5´的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3´-5´的外切活性降解的因素)；
 2.最好在反应前加Pfu DNA Polymerase。


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·三合一RNA上样液(A型,6X)
编号：BTN3130A
英文名称：RNA Loading Buffer
规格：1.5mL
本品是集RNA变性RNA、上样、RNA染色三种功能于一体的即用型溶液。

产品特点：
1．能提高RNA上样速度，免去繁琐的准备步骤，减少污染。
2．其含有的RNase抑制剂能抑制RNA样品中残留RNase的活性，保证电泳过程中RNA的完整性。
3．所含甘油和染料(仅BTN3130A含EB染料)，便于直接上样和UV观察RNA电泳条带，免去染色和脱色过程。
4．本产品与DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2完全兼容。

产品组成：

成分	规格
三合一RNA上样液	1.5ml
说明书	1份

本产品为红色液体，含红色的EB(*化乙锭)，有致癌性，避免用手直接接触。
另一红色电泳示踪剂的电泳速度相当于50nt的RNA。

储存条件：常温运输，4℃(短期)或-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按1:1-1:3的比例将RNA样品与RNA上样液混合(如5μL RNA+15μL RNA上样液)。
2. 65-85℃水浴保温10分钟,。
3. 冰浴5分钟后即可直接上样电泳。
 注：本产品含EB，所以琼脂糖凝胶中可以不必再加EB。本产品与甲醛琼脂糖变性凝胶或用DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2配制的非变性琼脂糖变性凝胶兼容。
4.电泳完毕后可直接将凝胶放在紫外灯下观察结果，RNA 条带成红色。

疑难解答：
Q：为何RNA样品在甲醛变性胶中的电泳效果比普通非变性胶差?
A：这是因为在非变性胶中，即使内部有切口的RNA分子(实际已经是两条RNA分子)也会通过形成发夹结构而跟完整的分子等速电泳，而在变性胶中，完整RNA分子和内部有切口的RNA分子将以不同的速度泳动，所以变性胶看起来效果不好是反应了真实情况，非变性胶看起来好只是一种假象。要求严格的实验(如CDNA文库构建)最好还是使用甲醛变性胶判断RNA的质量好坏。


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·血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
编号：BTN120810
英文名称：Blood nuclear DNA and mitochondrial DNA extraction kit
规格：25次
本试剂盒是在本公司血液DNA提取试剂盒产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。

产品特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2. DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50μg/mL 新鲜血液，线粒体DNA产率约为1μg/mL 新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5. 所用试剂安全无毒，健康环保。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白细胞核和线粒体的分离
1. 将3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。注意：最好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA 得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2. 向血液中加入等体积(3mL)的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分最好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000 g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清(含线粒体)到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mL D型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000 g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清(含线粒体)到第4 步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。
将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 将汇集的含线粒体的上清于4℃下15000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mL D型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9. 用1mL D型红细胞裂解液洗涤线粒体2次(每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀)。
10. 所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用)
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75μL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12. 再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清(含DNA)转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14. 加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000 g离心5分钟，去尽上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16. 重复上步一次。
17. 短暂离心，去尽残留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暂晾干半分钟，加入适量DNA 洗脱液2.0 溶解DNA(对细胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50μL DNA 洗脱液2.0)。
19. 65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD 检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。

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