动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)怎么卖

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百奥莱博专业生产销*(代"售")动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)怎么卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)怎么卖
规格：5次
编号：BTN111207A
产地：国产|进口
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

除动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)怎么卖外，我公司正在打折促销以下产品：

·SP6 RNA聚合酶
编号：BTN120307
英文名称：SP6 RNA Polymerase
规格：1000U
本酶是鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体SP6 DNA编码的酶，对SP6启动子序列具有高度特异性，不能识别其它生物来源的启动子。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5´→3´的RNA聚合酶活性，以含有SP6启动子序列的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

产品用途：
1．为Northern杂交以及Southern杂交制作高标记探针。
2．制作RNA剪接反应的前体。
3．以帽类似物为引物，制作Capped mRNA。

产品组成：

成份	规格
SP6 RNA聚合酶	50μL(20U/μL)
5×转录缓冲液	0.25mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol的AMP合成掺入到寡聚核苷酸片段(DE-81光吸收形式)所需的酶量。

·湿法电转液(干粉)
编号：BTN100928
英文名称：Wet Transfer Buffer Powder
规格：20L
本产品配制的溶液适用于湿转时，湿润、浸泡电转膜及垫子和用作电转工作缓冲液。用前直接加入蒸馏水与甲醇混匀即可。不含有机溶剂，便于储存和运输，且操作简便，一般适合分子量在100KD以上的蛋白。本产品可以回收重复使用2-3次，节约研发成本，如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。


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酸性茜素蓝B 3′-Nitroacetophenone 1058-92-0
ARB11103 人受体TNFRSF结合丝*酸苏*酸激酶2(RIPK2)elisa检测操作说明书 Human receptor tnfrsf-interacting serine-threonine kinase 2,ripk2 ELISA KIT
BL0913 FITC标记人IgG抗体
L-丝*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Indazole 5680-80-8
77-92-9 Citric acid 柠檬酸
BTN100214 预混型BCIP/NBT溶液 Premixed BCIP/NBT Solution
ARB14067 ALV J-Ab 检测服务 
BTN120643 硫*(代"酸")葡聚糖 Dextran Sulfate
BTN80932 一步法96孔板单菌落质粒DNAOUT(离心法) One-Step 96 Microwell Plate Single Colony Plasmid DNAOUT
PY01-083  酸水解酪蛋白  250克|1公斤  
磷酸酶B(兔肌) Sodium metavanadate 9012-69-5
BL0791 大鼠IgG抗原(干粉)
BL0952 胶体金标记羊抗兔IgG抗体
9048-46-8 牛血清白蛋白Ⅴ Albumin BovineⅤ
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油酸* BCIP, 2Na 143-19-1
37189-34-7 菠萝蛋白酶
ARB12047 大鼠乙*(代"醛")脱*酶(ALDH)Elisa定量检测 Rat aldehyde dehydrogenase,aldh ELISA KIT
健那绿 D-Glucuronic acid 2869-83-2
A2801-12 新生牛血清Newborn Calf Serum
9001-81-4 磷酸葡萄糖变位酶 Phosphoglucomutase
PY01-141  马铃薯浸出粉  250克  
3-[N-(1,1-二甲基-2-羟yi基)]*基-2-羟丙*(代"烷")磺酸*盐 2-Aminopyrimidine 102029-60-7
ARB10658 人血管活性肽酶抑制剂(VPI)Elisa分析 Human vasopeptidase inhibitors,vpi ELISA KIT
ARB13069 小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)elisa检测操作说明书 Mouse pulmonary activation regulated chemokine,parc ELISA KIT
6-*嘌呤 Rink Amide AM resin 87-42-3
Fmoc-L-羟脯*酸 Roxithromycin 88050-17-3

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