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大鼠超氧化物歧化酶(SOD)酶
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上海联硕生物科技有限公司
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大鼠超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中超氧化物歧化酶(SOD)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠超氧化物歧化酶(SOD)水平。用纯化的大鼠SOD抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶(SOD),再与HRP标记的SOD抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠超氧化物歧化酶(SOD)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
封板膜
2片(48)
2片(96)
密封袋
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品:225U/L
0.5ml×1瓶
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
样品稀释液
显色剂A液
显色剂B液
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
注意事项:
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
10U/L -200U/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
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