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- YB-CC9092
- 2025年12月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温/液氮保存
- 保质期：
永久
- 英文名：
小鼠胚成纤维细胞；Balb/3t3 clone A31
- 库存：
20
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
T25培养瓶/冻存管
Balb/3t3 clone A31细胞
细胞名称：人骨肉瘤细胞；Balb/3t3 clone A31
规格：T25培养瓶，1×106cells
形态特征： 成纤维细胞
生长特性：贴壁
描述
该细胞是胸腺激酶缺陷骨肉瘤细胞株。
培养条件：DMEM/F12(or MEM) 10%FBS （0.015 mg/ml溴甙）
传代方法：1:4~1:8传代；每周换液2-3次。
STR位点信息：
| STR Profile | AMEL | CSF1PO | D13S317 | D16S539 | D5S818 | D7S820 | TH01 | TPOX | vWA |
| Balb/3t3 clone A31 | X | 12 | 12 | 10 13 | 13 | 11 12 | 6 | 11 | 14 18 |
(Balb/3t3 clone A31细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项)
一、 复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
要注意的就是无菌操作！
(培养Balb/3t3 clone A31细胞的常规观察)
细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。
1. 细胞形态 生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细胞等。某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合，而令其着色。因而常用台盼蓝(trypan blue) 鉴别细胞死活，活细胞不着色，死细胞核呈蓝色。
2. 细胞生长 初代培养或传代的细胞悬液接种以后，经过长短不同的潜伏期后开始增殖。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。接种细胞长满瓶壁后，应及时做再培养。否则由于营养物消耗和代谢积累，细胞即进入停止期或退化期。此时细胞轮廓增强，细胞内常出现颗粒状堆积物，为膨胀的线粒体，细胞质呈空泡化，细胞变圆、粗糙，严重时细胞从瓶壁脱落，只有及时再做传代处理，才能使细胞继续生长繁殖。
3. 营养液 正常情况下，培养液呈桃红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，细胞会脱落死亡。当培养液酸化变黄时，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，需要更换新鲜培养液。培养液中如加Hepes或用5％CO2温箱培养可使pH维持相对稳定。更换营养液的时间，可依营养物的消耗而定，细胞生长旺盛时2～3d换一次，生长缓慢时，3～4d亦可。要特别注意各种细胞对pH值要求是不一样的。
4. 微生物污染 微生物污染培养细胞培养物后会出现pH值改变，培养液呈现混浊状。细菌感染后，由于细菌的运动，光镜观察可见有微闪光；真菌感染则在镜下见许多细丝状菌丝，有时还密集有群集孢子；支原体的污染需要借助一些检测手段才可检出。细胞污染以后一般应当废弃，对于重要的细胞株，可以参考相关专著，介绍采取一些措施清除污染。比较重要的实验、珍贵的细胞，至少由两个实验人员独立培养操作，或由一个人分次(不同时)操作。除培养实验室的卫生条件外，空气中的湿度与微生物污染关系密切。重要的、周期长的实验尽量安排在空气湿度低的秋冬季进行。
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文献和实验该词来源于希腊文的 Kλωγ，原义为小枝之集聚，但后来则指由无性繁殖所产生的同基因型的生物群，这是于 1903年由 H． J． Webber最早应用于生物学上的。过去曾译作具有繁殖意思的营养系或含有原语源意思的分支系（群），而现在则多按其原音直接称为克隆。现在该词在个体、细胞和基因等三方面都使用，而且任何一方面似乎都意味着来自同源的犹如复制一样的同一生物群体。（ 1）关于个体：由无性繁殖所增殖的种群均是克隆，这在植物方面，通过体细胞培养，在试管内繁殖、分化可以重新生出完整
在伯内特（F． M． Burnet）关于免疫的无性繁殖系选择学说中，对自身构成物质有发生免疫反应可能的某淋巴系细胞群，称为禁忌细胞株。禁忌细胞株虽依靠对自身的免疫耐受性而制止活动；但可以假定那种抑制机理一失败，那些细胞就对自身发生免疫反应，而出现自身免疫病。
近日，Cruiser™与市面上易出现假阳性的X错配酶，进行比较，实验结果见下： 下图为3T3细胞FADD基因敲除，已知在3T3细胞中FADD基因的敲除效率很低（其敲除pool测序无双峰），挑24个单克隆后经X酶切结果显示如图2，而经Cruiser™酶切结果显示如图3 图2 3T3细胞FADD基因X酶检测电泳图 图3 3T3细胞FADD基因Cruiser™检测电泳图 P1—Cruiser™酶切阳性对照 P2—X酶切阳性对照 结论：如上图结果显示，X酶
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