生物素化驴抗人IgG(H+L) 生物素化抗体

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名称：生物素化驴抗人IgG(H+L) 生物素化抗体
英文名：Donkey Anti-Human IgG,Biotin Conjugated
编号：WE0371
规格：100μl
产地：国产|进口
本产品为生物素标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别人IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应。生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin，SA)具有极高的亲和力，反应呈高度专一性。每个链霉亲和素分子具有4个生物素分子结合位点，因此，链霉亲和素可同时以多价形式结合生物素。生物素化的抗体与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素联合使用，将检测信号级联放大，最后通过显色反应或化学发光可检测到微量蛋白。

免疫原：人IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
应用范围：
WB 酶链亲和素检测(1：20000-400000)
ELISA(1：20000-400000)
Enzyme immunohisto/cytochemistry(1：500-5000)
Fluorescence Immunohisto/cytochemistry(1：200-1000)
Flow cytometry(1：200-1000)

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96949-21-2 中性树胶
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2-硝基乙酰**(代"胺") HOAT 552-32-9
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·DNATrans转染试剂
编号：WE0255
英文名称：DNATrans Transfection Reagent
规格：500μl
  DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。

实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系， 不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%，悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml，用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素，否则会导致细胞死亡。

使用方法：
1、对于大部分的细胞系， DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细胞，待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞：在细胞转染之前，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent，加入25μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl)，轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率)。
注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基，然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意：
1)该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表，该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。
3)优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。

附表：293T细胞转染参考数据

 

培养板	每孔表面积	铺板用培养基体积	DNA和稀释体积	DNATrans Transfection Reagent和稀释体积
96孔	0.3cm2	200μl	0.13μg至10μl	0.5μl至10μl
24孔	2cm2	500μl	0.8μg至25μl	2μl 至25μl
12孔	4cm2	1ml	1.6μg至50μl	4μl至50μl
35 mm	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
6孔	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
60 mm	20cm2	5ml	8.0μg至500μl	20μl至500μl
10 cm	60cm2	10ml	24μg至800ml	60μl至800μl

储存条件：2～8℃，避光


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·细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0199
英文名称：RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	100个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：Lysozyme(WE0214S)、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、如未特殊说明，所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109)，小心去除所有上清。
注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。
2、用含有Lysozyme的100μl TE缓冲液彻底重悬菌体，室温孵育。具体配方和孵育时间如下：

	TE缓冲液中Lysozyme的终浓度	孵育时间
G-细菌	400μg/ml	3-5分钟
G+细菌	3 mg/ml	5-10分钟

3、加入350μl裂解液RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇)，涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)，将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm离心2分钟。
4、向上步得到的滤液中加入250μl无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

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