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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 英文名:
RNase-Free Water
- 库存:
353
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货无RNA酶水品牌,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货无RNA酶水品牌
规格:100ml
产地:国产|进口
编号:WE0217
本品为不含RNase的水,常用于RNA的提取纯化、RT-PCR等分子生物学实验。
北京现货无RNA酶水品牌正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·Ni琼脂糖凝胶
编号:WE0272
英文名称:Ni-Agarose Resin
规格:10ml
该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力,能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点,较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固,有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力,提高纯化效率。较高的基团密度,大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下,对来源于各种表达系统(如杆状病毒,哺乳细胞,酵母以及细菌)中的His标签蛋白,均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子,可直接使用,方便,快捷。
支持物:CL-6B琼脂糖凝胶
载量:20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径:50-160μM
注意事项:
1、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT或EDTA。
2、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
3、为提高纯化效率,首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。可以使用线性或梯度浓度的咪唑(20-500 mM)洗脱蛋白,并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
4、为避免柱子被堵塞,请使用高纯度的试剂配制缓冲液,并通过0.45μM过滤器过滤。建议将裂解液进行离心,或者使用0.45μM过滤器过滤。
5、柱再生时,保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、可溶性蛋白纯化缓冲液配方:
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* |
| Soluble Binding Buffer | 20 mM | 10 mM | 0.5 M |
| Soluble Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M |
2、包涵体蛋白纯化缓冲液配方:
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* | 尿素/盐*(代"酸")胍 |
| Inclusion Body Binding Buffer | 20 mM | 5 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
| Inclusion Body Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意:
1)填料的上层是乙醇保护层,将填料和乙醇一起混匀,以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算,取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)本实验是通过重力作用使溶液流出,如果溶液不流出,可以给柱子一个外力,例如用大拇指对柱口轻轻按压一下,迫使其流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后,再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子,平衡结束后即可上样。
注意:柱体积指的是填料的体积。
III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液,超声裂解菌体。10000×g离心10分钟后,收集上清。
2、将上清液过柱,流速为10倍柱体积/小时。
3、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子,收集流穿峰。
4、使用5倍柱体积的Soluble Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
5、洗脱后,依次使用3倍柱体积的Soluble Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2~8℃保存。
Ⅳ 包涵体蛋白的纯化
1、收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml 细菌裂解液,超声裂解菌体。
2、离心,弃上清,将沉淀重悬于Soluble Binding Buffer 中(如有需要,可进行超声波处理,超声前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制剂混合物)。
3、重复操作2,直至包涵体清洗干净(呈较洁净的乳白色状)。
4、将沉淀重悬于Inclusion Body Binding Buffer中,冰浴1小时,使包涵体溶解。
5、10000×g离心20分钟,将上清以孔径为0.45μM的滤膜过滤。
6、将蛋白溶液负载上柱,流速为10倍柱体积/小时。
7、使用15倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer冲洗柱子,收集流穿峰。
8、使用5倍柱体积的Inclusion Body Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
9、洗脱后,依次使用3倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2~8℃保存。
注意:在纯化包涵体蛋白时,所有缓冲液均含有变性剂,需要降低Binding Buffer中的咪唑浓度(5 mM或更低)。洗脱时,若蛋白在较高pH下洗脱失败,可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5,pH5.9或pH4.5)。
Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后,结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色),可以用以下方法再生,提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6M盐*(代"酸")胍冲洗后,使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积100%乙醇冲洗,再依次使用1倍柱体积的75%、50%、25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水,3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、封柱后2~8℃保存。
8、再次使用前,需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗,然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生,3个柱体积的Binding Buffer平衡。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
北京现货无RNA酶水品牌关键词:WE0217,无RNA酶水,RNase-Free Water
·低背景ECL化学发光检测试剂盒
编号:WE0307
英文名称:cwECL Western Blot Kit
规格:50ml|250ml
低背景化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的低背景底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。其高灵敏度能够检测ng级别的抗原,发光信号强
烈持久,可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
试剂盒组成:
| 组成 | 50ml | 250ml |
| cwECL-A(Luminol) | 25ml | 125ml |
| cwECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
注意事项:
1、在与膜发生接触过程中,请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材,避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下,配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液,故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等,详情请查询公司网站。
操作步骤:
1、二抗孵育完毕后,将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量,将cwECL-A和cwECL-B按照1:1的比例等体积混合,配制为发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液,将发光底物工作液滴加在印迹膜上,确保工作液覆盖整张膜,室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液,将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光,或将膜放置到化学发光成像仪内,按照仪器说明书进行检测。
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 胶片反相(白色条带,黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 暗室中看到强烈发光 | ||
| 发光信号持续时间过短 | ||
| 信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多,消 耗底物过快,引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
| 蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
| 高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 封闭不足 | 优化封闭程序 | |
| 封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
| 冲洗不充分 | 增加冲洗时间,次数 | |
| 曝光过度 | 减少曝光时间 | |
| 抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
| 蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
| 膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
| 胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
| 出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
| 出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
| SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
储存条件:2~8℃,避光保存
北京现货无RNA酶水品牌关键词:WE0217,无RNA酶水,RNase-Free Water
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