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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
- 库存:
987
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒促销
英文名:Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白,对于相对分子量小的,尤其是10 kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽,成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全*(代"套")试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的凝胶,方便、快捷,电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| 49.5%T 3%C | 30ml |
| 49.5%T 6%C | 100ml |
| Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer | 140ml |
| Glycerol | 30ml |
| APS | 0.5 g |
| TEMED | 750μl |
本产品所提供的APS(过硫*(代"酸")铵)为固体粉末,使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。
注意事项:
1、本产品所提供的APS(过硫*(代"酸")铵)为固体粉末,使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水),10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换,使用-20℃保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加纯水时要小心操作,加水时速度不能太快。
4、丙*(代"烯")酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,凝胶浓度配方参考附表。
I 配制分离胶
1、将不同体积的纯水、49.5%T 6%C、Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer和Glycerol(甘油)加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(对于1 mm mini-gel,分离胶溶液加约4ml),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1 mm的mini-gel,夹层胶溶液加约1ml), 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
附表Tricine-SDS-PAGE凝胶配方表:
| 组份 | 分离胶(胶浓度/配制体积) | 夹层胶 (胶浓度/配制体积) |
浓缩胶 (胶浓度/配制体积) |
||
| 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 4%/2ml | |
| 49.5%T 3%C | - | - | - | 0.407ml | 0.16ml |
| 49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | - | - |
| 凝胶缓冲液 | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.496ml |
| 甘油 | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | - | - |
| ddH2O | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
| 10% AP | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
| TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
III 配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。
IV 电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入阳极缓冲液,内槽加入阴极缓冲液,30V预电泳10 min,将样品(已经过Tricine专用上样缓冲液处理)加入点样孔后30V电泳1小时,100V电泳至*酚蓝到达胶底部后停止电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
储存条件:2~8℃
欲咨询购买Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒促销,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·水性封片剂
编号:WE0317
英文名称:Mounting Solution(Aqueous)
规格:10ml
在免疫组化切片染色中,有些显色底物(如AEC,AP-Red)生成的颜色产物以及一些核复染试剂(如核快红)为脂溶性,可溶于有机溶剂。因此,染色和复染过程中若用到此类试剂,就不适合用梯度酒精脱水、二甲*透明、中性树胶封片,而应使用水性封片剂进行封片。本产品适用于AEC、AP-Red染色,以及BCIP/NBT染色(核快红复染)后封片使用。
注意事项:
1、本封片剂是水溶性的,凝固后再遇水仍可溶解。因此封好的组织片应避免与水接触,否则需要再次凝固或重新封片。
2、本产品含有防腐剂,操作时应戴手套。
操作步骤:
1、IHC染色结束后,擦干组织周围水分,加适量(一般约100μl)水性封片剂于组织上,使其覆盖整个组织表面。
2、将切片放置于干净平整处,使封片剂凝固。封片剂完全凝固时间:室温1小时左右,65ºC 5-10分钟。
实验图例:
水性封片剂封片后显微照相效果(400倍放大)
储存条件:室温
Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒促销关键词:Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒,Tricine-SDS-PAGE Gel Kit,WE0279
·BAmp DNA Polymerase
编号:WE0105
英文名称:BAmp DNA Polymerase
规格:500U
BAmp DNA Polymerase在具有5"-3"DNA聚合酶活性的同时具有3"-5"外切酶活性,是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面,其优势更加明显,所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力,保真度高于普通Taq酶。优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛,即使以复杂的基因组DNA为模板,也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂(C-Solution)使GC含量高,有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。适用于高保真度的长片段PCR扩增和复杂模板的PCR扩增,如构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。
产品组成:
| 组份 | 500U |
| BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml |
| 5×C-Solution(PCR Enhancer) | 1.8ml |
注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。
活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一个月,无明显活性改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| 5×C-Solution | 10μl | 1× |
| ddH2O up to | 50μl |
注意:
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)当利用常规条件仍然未能得到扩增时,可以加入5×C-Solution(PCR Enhancer),PCR增强剂可以使富含GC,有二级结构和重复序列的复杂模板到高效扩增,可以提高反应的特异性。但PCR增强剂也有可能使常规条件成功扩增的反应扩增失败,因此第一次使用PCR增强剂时建议设置一个不加PCR增强剂的对照。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒促销关键词:Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒,Tricine-SDS-PAGE Gel Kit,WE0279
147-85-3 L-Proline L-脯*酸
ARB13146 小鼠活化蛋白C(APC)酶免分析 Mouse activated protein c,apc ELISA KIT
ARB13954 猪载脂蛋白A1(Apo-A1)酶标法分析 Porcine apoprotein a1,apo-a1 ELISA KIT
1404-93-9 Vancomycin 盐*(代"酸")万古霉素
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角鲨烷 4-Fluorobenzoic acid 111-01-3
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乙二*(代"胺")四乙酸二**盐四水物 dIMP 29932-54-5
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F050314 马IgG抗体 Horse IgG
SJ0688 300bp
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PY02-330 FraserⅠ增菌液基础 250克
ARB10422 人丙*(代"酮")酸激酶(PK)酶联免疫定量检测 Human pyruvate kinase,pk ELISA KIT
79-06-1 丙*(代"烯")酰胺 Acrylamide
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BTN100838 遗传霉素(G418)干粉 G418 Sulfate(Geneticin)Powder
ARB13427 鸡弓形虫循环抗体(TCAb)elisa检测
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文献和实验电泳过程同样很重要啊。电转的时候其实只要预染marker只要转到膜上了,那么你的相应分子量的目的蛋白也就转过去了,所以这就是你摸索条件的指示带。3、电泳过程中有推荐TRICINE-SDS-PAGE胶来进行电泳,会更有利于小分子量蛋白的分离,研读了一些文献,这个效果应该还是很肯定的,但是鄙人没有做过这种电泳,所以给不了什么经验,我最终还是用普通SDS-PAGE胶做出来的,不过鉴于我的蛋白分子量是11KD,那么假如你是几KD甚至更小分子量的多肽,那么还是建议你用TRICINE-SDS-PAGE胶来电
用于SDS-PAGE和非变性的Native PAGE;Tris-Tricine Gel则用于分离肽段。 因为是碱性环境(pH 8.8),胶易降解,所以只能保存12周(除去订货和路上的时间,到手估计只有4周了)。有多种浓度和孔数供选择,蛋白分离范围请看下表。Ready Gel可以分离小至1 kDa的蛋白,不过对于250 kDa以上的蛋白,就无能为力了。它是一块一块单独售卖的,每块的价格在130左右,偏贵,不过偶尔买一块来跑个漂亮的电泳图,用来发paper,还是可以接受
Gel有两种:Tris-HCl Gel和Tris-Tricine Gel,Tris-HCl Gel主要用于SDS-PAGE 和非变性的Native PAGE;Tris-Tricine Gel则用于分离肽段。 因为是碱性环境(pH 8.8),胶易降解,所以只能保存12周(除去订货和路上的时间,到手估计只有4周了)。有多种浓度和孔数供选择,蛋白分离范围请看下表。Ready Gel可以分离小至1 kDa的蛋白,不过对于250 kDa以上的蛋白,就无能为力了。它是一块一块单独售卖的,每块的价格
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