快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货
编号：WE0141
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0141-5ml	WE0142-5ml	WE0143-5ml
2×BaFaSYBR Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaFaSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	20 s
变性	95℃	3 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	30 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·磁珠法游离DNA提取试剂盒
编号：WE0204
英文名称：MagDNA Free-Circulating DNA Extraction Kit
规格：96次
  本试剂盒适用于从血浆、血清、羊水、淋巴液、尿液等无细胞体液中简单、高效的纯化回收游离DNA(Free circulating/Cell-free DNA)。在高盐存在时，游离DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的游离DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR以及二代测序建库等下游实验。该试剂盒还可用于病毒DNA的提取。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer KCL	96ml
Buffer KCW1(浓缩液)	72ml
Buffer KCW2(浓缩液)	60ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	4ml

自备试剂：异丙醇、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取率低。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer KCW1和Buffer KCW2中加入无水乙醇并做好标记。
4、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
5、Magbeads在使用前一定要涡旋震荡20秒使其充分混匀。

操作步骤：
第一次使用前请检查Buffer KCW1和Buffer KCW2中是否已加入无水乙醇。
1、向1.5ml的离心管中加入20 ul 蛋白酶K ，之后加入300 ul血浆。
2、向上一步的离心管中加入300 ul Buffer KCL，涡旋震荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟。
3、将上一步的离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。
4、向上一步的离心管中加入150 ul异丙醇，涡旋震荡混匀后短暂离心。之后向离心管中加入40 ul彻底混匀的Magbeads，涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡10分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)或连续颠倒混匀10分钟。
注意：如果样品量较多，可将异丙醇与Magbeads提前按比例混匀，之后同时加入裂解产物中。
5、将上一步的离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)，期间避免接触Magbeads。
6、将离心管从磁力架上取下，加入500 ul Buffer KCL后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后弃去溶液。
注意：如果样品为血清、羊水、淋巴液或尿液，Buffer KCL漂洗步骤可去除。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW1后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
8、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW2后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管壁上有液珠，可向离心管中加入800 ul无水乙醇。盖盖后颠倒离心管，之后彻底去除无水乙醇。
11、将离心管从磁力架上取下，加入30-100 ul Buffer EB或去离子水。涡旋震荡时Magbeads完全悬浮于洗脱液中后将其放入56℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
12、将上一步的离心管放置于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)


快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货关键词：BaFaSYBR Mixture,快速实时荧光定量PCR预混体系,WE0141


·二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)
编号：WE0228
英文名称：NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
规格：24次|96次
  本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。

试剂盒组成：

组份	24次	96次
10×End Repair Buffer	200μl	800μl
End Repair Enzyme Mix	48μl	192μl
Ligation and Nick Repair Buffer	400μl	2×800μl
T4 DNA Ligase	48μl	192μl
Bst DNA Polymerase	48μl	192μl
2×HiFidelity PCR Mix	600μl	2×1.2ml
10×Primer Mix(5μM each)	150μl	600μl

自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。

DNA建库流程示意图：

起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。

DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。

试剂	体积
10×End Repair Buffer	6μl
End Repair Enzyme Mix	2μl
fragmented DNA	X(10ng～1μg)
RNase-Free Water	Up to 60μl

2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃

Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。

试剂	体积
Ligation and Nick Repair Buffer	10μl
T4 DNA Ligase	2μl
Bst DNA Polymerase	2μl
Adaptor A	7μl
Adaptor P1	7μl
RNase-Free Water	12μl
Total volume	40μl

注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。

插入DNA 量/反应	不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度
	130 bp	260 bp	320 bp	410 bp
1μg	10μM	10μM	5μM	5μM
500ng	5μM	5μM	2.5μM	2.5μM
100ng	1μM	1μM	0.5μM	0.5μM

2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃

Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
  构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；

另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：

试剂	体积
连接adaptor后的DNA片段	20μl
2×HiFidelity PCR Mix	25μl
10×Primer Mix(5μM each)	5μl
总体积	50μl

2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30s
变性	98℃	10s	4～12个循环
退火	65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5min

注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。

PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。

储存条件：-20℃


快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货关键词：BaFaSYBR Mixture,快速实时荧光定量PCR预混体系,WE0141

ARB10215 人β防御素1(HBD-1)elisa检测说明书 Human β defensin 1, hbd1 ELISA KIT
ARB10563 人丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)尿液中含量检测 Human mitogen activited protein kinase,mapk ELISA KIT
ARB10207 人β2糖蛋白I(β2GPI)Elisa定量检测 Human beta2 glycoprotein1,β2-gp1 ELISA KIT
PY02-307  动力吲哚尿素培养基  250克  
*基甲基树脂 α-L-Fucosidase
73-40-5 Guanie 鸟嘌呤
ARB13254 小鼠游离脂肪酸(FFA)含量分析 Mouse free fatty acids,ffa ELISA KIT
甲基-α-D-吡喃半乳糖苷 TPP 97-30-3
F020203 山羊抗小鼠IgG2a抗体 Goat Anti-Mouse IgG2a
ARB13489 鸡热休克蛋白60(Hsp-60)酶标法分析 Chicken heat shock protein 60,hsp-60 ELISA KIT
BTN80202 柱式DNA PAGE胶回收试盒 Column PAGE DNABACK
F030409 胶体金标记山羊抗小鼠IgG3抗体 Goat Anti-Mouse IgG3*GOLD
PY02-023  马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)  250克  
ARB11851 人凝胶原蛋白(gelson)检测服务 Human gelson ELISA KIT
ARB11036 人纽蛋白(VCL)免费代测 Human vinculin,vcl ELISA KIT
ARB11117 人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)含量分析 Human pulmonary surfatcant-associated protein a,sp-a ELISA KIT
还原辅酶Ⅱ四*盐 Fast red B salt 1,5-Naphthalenedisulfonate 42934-87-2
吐温65 Sodium D-glucuronate 9005-71-4
BTN131080 重组蛋白G Recombinant Protein G
ARB12094 大鼠心肌特异性肌*蛋白T(cTnT)elisa检测说明书 Rat cardiac isoform of tropnin t,ctnt ELISA KIT

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购快速实时荧光定量PCR预混体系北京厂家现货。