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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
长期
- 英文名:
BSA Blocking Buffer
- 库存:
257
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)批发在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)批发
品牌:百奥莱博
英文名:BSA Blocking Buffer
编号:WE0306
产地:国产|进口
规格:500ml
Western Blot 实验中,为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附,导致实验结果不清晰,通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以BSA为基础,配合其他有效成份,可快速高效地封闭膜上多余的结合部位,减少非特异结合情况的产生,降低背景,适用于各种转印膜的封闭,操作方便快捷。另外,本产品特别添加了蛋白稳定剂,可保证每次实验封闭效果稳定可靠。
注意事项:
1、每次使用时,必须保证封闭液将印迹膜完全浸没,以免影响封闭效果。
2、本产品含有防腐剂,操作时请佩戴手套进行防护。
3、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤:
1、本产品无需稀释,开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后,将印迹膜放入容器中,加入适量BSA Blocking Buffer(以完全覆盖印迹膜为宜)。
3、室温孵育30分钟至2小时,必要时可2~8℃孵育过夜。
4、封闭结束后弃去BSA Blocking Buffer,进行Western Blot后续操作。
储存条件:室温
Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)批发极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
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37326-33-3 透明质酸酶 Hyaluronidase
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5625-37-6 PIPES 哌*(代"嗪")-1,4-二乙磺酸
Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)批发关键词:Western Blot封闭液Ⅰ,BSA Blocking Buffer,WE0306,Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)
·FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号:WE0392
英文名称:Goat Anti-Mouse IgG, FITC Conjugated
规格:100μl
产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的山羊抗体,特异识别小鼠IgG重链和轻链。本产品检测灵敏度高,本底低,对其他种属IgG无明显交叉反应。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究,在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。本
免疫原:小鼠IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:0.05%叠氮*
荧光团:FITC,Amax=492; Emax=520
应用范围:Immunofluorescence(1:25-100)
·人类cDNA
编号:WE0227
英文名称:Human Placenta cDNA
规格:100μl(20次反应)
本产品是以人胎盘组织RNA为模板,Oligo(dT)以及Random为引物, 用百奥莱博的高灵敏度的逆转录酶反转录得到的PCR即用型cDNA,可用于PCR实验的阳性对照。纯度:OD260/280≈1.8
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系:
| 试剂 | 50μl体系 | 终浓度 |
| 10×Taq PCR Buffer with Mg2+ | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,2.5 mM each | 4μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Human Placenta cDNA | 5μl | |
| Taq DNA Polymerase,2.5 U/μl | 0.5μl | |
| RNase-Free Water | 补水至50μl |
注意:
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的10×PCR Buffer中已经含有15 mM*离子,可根据丌同的引物对和模板来调节*离子浓度,由此优化反应体系。
2、将混合好的液体进行PCR反应。
3、结果检测:反应结束后取5μl反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
储存条件:-20℃,避免反复冻融
Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)批发关键词:Western Blot封闭液Ⅰ,BSA Blocking Buffer,WE0306,Western Blot封闭液Ⅰ(BSA)
·固定组织RNA提取试剂盒
编号:WE0196
英文名称:RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总RNA。适合从小于30 mg的石蜡包埋组织或切片中抽提高纯度的总RNA,本试剂盒无需使用酚/*仿抽提和异丙醇沉淀,一小时内即可完成多个样品的抽提。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K,释放福尔马林固定或组织切片样本中的RNA,无需过夜操作;消化后的样品在较高的温度孵育后,去除由福尔马林交联造成的抑制作用,有效释放组织切片中的RNA,而避免危害RNA的完整性;优化的缓冲系统使裂解液中的RNA可特异结合到硅胶吸附膜上,而其他污染物可流过膜;可通过漂洗步骤有效去除,经过洗脱的RNA可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR和印迹分析等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GL | 25ml |
| 蛋白酶K | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
自备试剂:无水乙醇(新开封或提取RNA专用)、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。
产品特点:
1、安全-无酚*仿等有机物抽提。
2、快速-可在一小时内完成实验。
3、高效-提取RNA得率高、纯度好。
4、可从石蜡包埋或福尔马林固定样品中提取高纯RNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入0.625ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3、获得样品后,要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定,固定时间以14-24小时为宜,时间过长易导致RNA断裂,影响下游实验。
4、确保包埋前的样品彻底脱水,残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
5、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、样本处理:
① 石蜡包埋样本:用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉,露出组织。
② 福尔马林等固定液中的样本:取约20 mg的样本,切成小块,置于离心管中,加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡,12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,重复3次,可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意:如果样品表面已经暴露在空气中,请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中,加入1ml二甲*,盖紧管盖,涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟,小心吸弃上清,注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇,涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟,弃上清,注意不要吸弃沉淀。
注意:乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖,室温或最高至37℃孵育10分钟,直至无乙醇残留。
7、加入150μl Buffer GTL,重悬沉淀;加入10μl 蛋白酶K ,涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育15分钟,直至样品完全溶解。80℃孵育15分钟。短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸,孵育的温度过高或时间过长可能造成RNA断裂,产生RNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温,直至水浴锅或干浴锅温度达到80℃后再把样品置于80℃孵育。
9、加入320μl Buffer GL,涡旋震荡彻底混匀。
10、将步骤9中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的过滤柱中。12000rpm离心1分钟,收集滤液。
11、在步骤10得到的滤液中,加入720μl无水乙醇,涡旋震荡彻底混匀。
注意:加入无水乙醇后,可能有少量沉淀物析出,但不影响后续操作。
12、将步骤11中所得的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
16、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μlRNase-Free Water,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-20℃保存RNA。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤16。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤16。
储存条件:室温(15~30℃)。
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文献和实验Blotting with BSA1. Blot in 5% mile/ 1X PBST (or 1X TBST) --60'/Rt2. Wash 2X for 5' in 1XPBST3. 10Ab in 1% BSA/1X PBST --60'/Rt4. Wash PBST 15', then 3x for 5' each in 1X PBST5. 20Ab in 1% BSA/1X PBST --60'/Rt (aHRP)--6. Wash 15' with 1X PBST
我觉得你首先应拿一个别人已经做过western blot证实条带条件好的蛋白样本来做对比,排除你在做western操作过程的问题 再考虑是你的抗体问题或者是你的蛋白样本的问题 qingdaomdbio 考虑一下封闭液有没有问题 llh刘丽华 我又摸了几次条件,延长了转膜时间,结果还不如现在的结果,我换成5%BSA封闭,结果什么也没有,关键是我现在连上面的结果都重复不出来了,我都不知道怎么办了,但是内参每次
llh刘丽华 各位好:我做了1个多月western blot了,内参跑得还可以,但是目的蛋白总是跑不好,今天跑出来非特异性条带很清楚,而目的条带却很淡,不知是什么原因!前一次也是这种情况,我就延长封闭时间至2h,一抗1:700,二抗1:5000,请各位高手帮忙分析一下吧!下面是我的图片,最下面,模糊的一条(靠图片中间的一条)是我的目的条带! coffeeshine 如果非特异带很清楚,延长封闭时间没作用
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