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- 百奥莱博
- 北京
- WE0189-XRV
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
- 库存：
962
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)库存
品牌：百奥莱博
规格：10次|50次
编号：WE0189
英文名：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
产地：国产|进口
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5ml样本，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 10次 | 50次 |
| Buffer CL | 45ml | 220ml |
| Buffer CB(浓缩液) | 60ml | 300ml |
| Buffer GTL | 15ml | 60ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 3ml | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 3ml | 15ml |
| Buffer EBL | 2ml | 10ml |
| 蛋白酶K | 100 mg | 3×180 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 5ml | 30ml |
| 吸附柱DG及收集管 | 10套 | 50套 |
| 延伸管(20ml) | 10个 | 50个 |
| 连接管 | 10个 | 50个 |
| 离心管(L-1.5 m l) | 10个 | 50个 |
保存条件：吸附柱DG置于2～8℃，其他组分室温(15～30℃)
产品特点：
1、适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高：使用高效微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。
自备试剂：无水乙醇、异丙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向每管蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒最多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。
操作步骤(血清、血浆样本1-5ml)：
1、样品处理：向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本，若样本不足1ml，加入PBS溶液补至1ml体积。
注意：当样品量超过1ml时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入800μl Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意： 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
附表1：不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量
| 加入物 | 加入量(ml) | ||||
| 样本 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 蛋白酶K | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
| Buffer CL | 0.8 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 4 |
| Buffer CB | 1.8 | 3.6 | 5.4 | 7.2 | 9 |
储存条件：室温(15～30℃)。
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高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)库存关键词：高纯游离DNA中量提取试剂盒,负压法,CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction K,WE0189,高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
·Protein A+G琼脂糖凝胶
编号：WE0268
英文名称：Protein A+G Agarose
规格：1ml
本产品为Protein A和Protein G 共价交联到Agarose beads上的产物，并保存在20%乙醇溶液中。本产品包含1ml protein A+G agarose和1ml 20%乙醇溶液，即为50%悬浮介质。主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。免疫沉淀抗体包括Mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，Rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，Rabbit IgG，Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本产品也可以用于抗体的纯化。
注意事项：
1、本产品保存在2～8℃ 20%的乙醇中，从低温取出后恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、使用前请充分颠倒若干次使混合均匀。
使用方法：
I 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)：
1、蛋白样品的准备：
a. 对于细胞样品，用1×PBS洗涤一次。2×106细胞加入200μl细胞裂解液，以此类推。
b. 对于组织样品约20 mg加入200μl组织蛋白抽提试剂，以此类推。
注：如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释；如果蛋白样品浓度过低，可适当减少裂解液的用量。
2、取约200μg至1 mg蛋白样品，与0.2μg至2μg纯化后的抗体混合，4℃缓慢摇动过夜。
3、取20-40μl充分重悬的Protein A+G Agarose加入到一支新的1.5ml离心管中，短暂离心，小心吸弃上清。
4、加入500μl 1×PBS洗涤Protein A+G Agarose，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
5、将步骤2的抗原抗体复合物加入到洗涤后的Protein A+G Agarose中，4℃孵育1-3个小时，短暂离心，小心吸弃上清。
6、加入500μl 1×PBS洗涤，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
7、向沉淀中加入20-40μl 2×SDS-PAGE电泳上样缓冲液，涡旋重悬沉淀，短暂离心把样品离心至
8、蛋白煮沸变性5分钟，短暂离心后取部分或全部上清，用于SDS-PAGE电泳或Western Blot等。暂时不用的样品可在-20℃保存。
II 免疫共沉淀(CO-IP)：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(CO-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但以用新鲜的蛋白样品为佳。
储存条件：2～8℃，避免冻存。
高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)库存关键词：高纯游离DNA中量提取试剂盒,负压法,CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction K,WE0189,高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
·哺乳动物蛋白抽提试剂盒
编号：WE0262
英文名称：Mammalian Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
本试剂盒能够快速，温和，高效的裂解哺乳动物细胞，有效提取细胞浆和细胞核蛋白。该试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验，如：报告基因和酶活性测定，免疫检测，蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
试剂盒组成：
| 组份 | 25次 | 100次 |
| Mammalian Protein Extraction Reagent | 25ml | 100ml |
| Protease Inhibitor Cocktail | 250μl | 1ml |
保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温
注意事项：
1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞，较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提，建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、表1中所列的是贴壁细胞蛋白提取的最佳使用量，先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。
3、也可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20 mg，需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白，可通过BCA法进行蛋白定量分析。
使用方法：
贴壁细胞蛋白抽提
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、小心倾去贴壁细胞的培养液，使用PBS漂洗细胞。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，在冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解液转移至离心管中，冰上孵育20分钟，让细胞充分裂解(试剂使用量请参考附表1，冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、14000×g离心5-10分钟。
5、转移上清液至新管中，用于进一步分析。
悬浮细胞蛋白提取
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将悬浮细胞2,500×g，离心10分钟，弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g，离心10分钟，弃去上清。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大，可首先使用少量1×工作液重悬细胞，然后加入剩余工作液。
5、吹打均匀后，冰上放置20分钟，让细胞充分裂解(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
6、14000×g离心15分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步分析。
附表1. 抽提试剂使用量推荐表
| 细胞培养板类型或平皿类型 | 抽提试剂使用量 |
| 100mm | 500-1000μl |
| 60mm | 250-500μl |
| 6孔培养板 | 200-400μl/孔 |
| 24孔培养板 | 100-200μl/孔 |
| 96孔培养板 | 50-100μl/孔 |
附表2. 常见问题及解决办法
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 低提取率 | 低蛋白表达量 | 优化转染系统 |
| 试剂使用量不够 | 增加抽提试剂使用量 | |
| 试剂无法溶解细胞膜 | 增加裂解时间或者加大晃动幅度 | |
| 无法获得膜蛋白 | 更适合提取核浆蛋白 | 使用真核细胞膜蛋白抽提试剂盒 |
储存条件：-20℃
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文献和实验相关实验
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no.DQ434847）转入烟草（Nicotiana tabacum L.cv.W38），所得T0代植株在16h光照（25℃）/8h黑暗条件下培养。1.2 方法1.2.1 转基因植物的PCR鉴定 随机挑取六株T0代转基因烟草，采用植物基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取基因组DNA模板，另外分别以未转化的野生型烟草基因组DNA以及含有OSsec27p的重组质粒作为阴性和阳性对照模板，使用OSsec27p基因特异性引物进行PCR扩增。 取部分扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，检测
杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。随着基因工程研究技术的迅猛发展，新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型：一、固相杂交将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶 DNA 自我复性等优点
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