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- 保存条件:
常温运输及保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Mega PCR Clean-Up Kit
- 库存:
大量
- 供应商:
联迈生物
- 规格:
5次
本试剂盒可用于海量PCR产物回收。在大规模制备PCR产物时(如DNA Marker的制备),往往需要回收毫克级的PCR片段,如果使用传统的大提柱式法, 由于需要加3倍体积的上柱液,一次纯化实际处理量只有5-6 mL PCR反应液。此 外,由于需要多次(一般需要4-6次)洗脱才能将PCR片段全部从离心吸附柱上回 收,得到的PCR片段浓度很难控制(一般都较稀)。为解决上述问题,本公司特开 发出本产品,
它具有下列提点:
1. 海量处理。本试剂盒一次可以从40 mL的PCR反应液中纯化到毫克级的PCR片 段,是一般大提离心吸附柱的7-8倍(一次只能纯化6 mL)。
2. 快速。一次操作只需十分钟左右,时间是大提柱式法的1/3左右。
3. 回收的DNA高度浓缩,方便后续使用。由于得到的是DNA沉淀,可以溶解在 任何体积的溶液中,而柱式法需要反复洗脱才能得到全部DNA,很难控制最后 DNA的终浓度。
4. 回收效率高达90%,但片段长度不能低于100 bp。
5. 纯度高。回收的DNA可直接用于电泳、酶切、连接等多种分子生物学实验。
6. 非常容易放量或减量操作。因为是沉淀法,最大处理量由离心管的大小决定, 比使用离心吸附柱(最大处理量固定)更加方便。
海量PCR片段纯化试剂盒使用及效果
在PCR反应产物中,加入0.1倍体积的溶液A,摇晃混匀后室温放置5分钟, 10000 g离心10分钟,弃上清,加入跟PCR溶液等体积的溶液B,摇晃混匀后 10000 g离心两分钟,所得沉淀即为回收的PCR片段,溶于适量溶液即可。
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文献和实验糖凝胶上检测分析。如图一所示 图一:2.2 超声破碎后,8000g,30秒,4°C,离心。将上清移入新的管子中。开始准备进行染色质免疫共沉淀(IP)。2.3 每份超声样品取50ul,这时的样品标记为INPUT,用于定量DNA浓度和作为PCR的空白对照。超声后的染色质应立刻冻入液氮中或者储存于-70°C可储存2个月。避免多次反复冻融。3检测DNA浓度1INPUT样品用于为后来的IP样品计算DNA浓度。DNA可采用PCR纯化试剂盒(加入70ul洗脱液,接着进入3.2a)或者采用酚/氯仿抽提(加入350ul
说明都显示单片段插克隆效率> 95%——片段越多效率会下降的)。市售产品中,是否包含感受态细胞,是否包含质粒纯化试剂或者 PCR 纯化试剂,都会影响产品单价。 后继的筛选验证工作同经典方法一样——抗性筛选,挑克隆扩增纯化,电泳+酶切或者 PCR 验证,最后挑几个最有可能的克隆去测序验证。如今分子克隆中的 PCR 一般都会选择高保真酶——出错率比 Taq 低得多、扩增长片段效果更好,要是几十 kb 还得是 EX 加长版高保真酶——相比后继测序验证的费用,这钱万万省不得的。 总而言之,基于同源序列的无缝
盒包括柱离心式DNA胶回收及PCR产物快速纯化试剂盒、柱离心式质粒小量快速抽提试剂盒、柱离心式高纯质粒小量快速抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒小量快速抽提试剂盒、 质粒抽提、DNA胶回收、PCR产物纯化柱离心式多用途小量纯化试剂盒、柱离心式质粒中量抽提试剂盒 、柱离心式高纯度质粒中量抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒中量抽提试剂盒 、核酸纯化小柱(质粒小抽、胶回收)、核酸纯化大柱(质粒中抽、大抽)等10个产品。 现因公司产品结构调整,转让该系列试剂盒的配方、生产工艺、生产设备。包教
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