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江蓝纯
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20次
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2006 | pUCm-T载体 | 20次 | 246.00元 |
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中,形成含有目的片段的重组载体。
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在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验,所以我这里写的T载体构建只能算是入门级,给新手提供一点思路,有什么不足之处还希望大家多多指正。 我克隆的这个片段大小是1.8kb,用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。 反应体系:5*buffer 5 ul MgCl2 5 ul dNTPs 8 ul Primer 1 1 ul Primer 2 1 ul LA-Taq 0.5 ul cDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA) ddH2O up to 50 ul
Making the T-vector: 1.Digest 5 ug of vector DNA ( pBluescript & pUC18) with a restriction enzyme that generates a unique blunt end site, for example EcoRV or Sma I ( we prefere EcorV for it's stable activity at 37 C) for 2 hours at 37 C. 2.Run
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