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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
pCMV-Tag 3B
- 库存:
大量
- 供应商:
钰博生物
- 规格:
1ug/5ug
载体基本信息
| 出品公司: | Ybscience |
|---|---|
| 载体名称: | pCMV-Tag 3B ; pCMV-Tag3B |
| 质粒类型: | 哺乳动物表达载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 克隆方法: | 多克隆位点;限制性内切酶 |
| 启动子: | CMV |
| 载体大小: | 4327 bp |
| 5' 测序引物及序列: | CMV Forward:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | c-myc tag (N-末端) |
| 载体抗性: | 卡那霉素 |
| 筛选标记: | Neomycin |
| 克隆菌株: | XL1-Blue |
| 宿主细胞(系): | -- |
| 备注: | c-myc标签含10个氨基酸残基(EQKLISEEDL); CMV启动子驱动目的蛋白的高水平表达; pCMV-Tag 3B,B,C的差别仅在于读码框(阅读框)处。 |
| 稳定性: | 瞬表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
载体质粒图谱和多克隆位点信息



载体简介
ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED T4 DNA ligase Taq DNA polymerase Taq DNA polymerase buffer TE buffer CIAP Falcon 2059 polypropylene tubes (15-ml) Water baths (37°C and 42°C) XL1-Blue Genotype: recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)]. The XL1-Blue cells supplied with the pCMV-Tag vectors are not competent cells. Refer to Hanahan (1983) for a protocol for producing competent cells.
载体序列
LOCUS pCMV-Tag 3B 4327 bp DNA SYN
DEFINITION pCMV-Tag 3B
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4327
/organism="pCMV-Tag 3B"
/mol_type="other DNA"
promoter 16..568
/label="CMV_immearly_promoter"
misc_feature 71..358
/label="CAG_enhancer"
misc_feature 525..545
/label="CMV_fwd_primer"
promoter 526..595
/label="CMV_promoter"
promoter 620..639
/label="T3_promoter"
misc_feature complement(757..773)
/label="pBluescriptKS_primer"
promoter complement(829..847)
/label="T7_promoter"
misc_feature 904..963
/label="SV40_3_splice"
terminator 1014..1242
/label="SV40_PA_terminator"
misc_feature 1212..1231
/label="EBV_rev_primer"
rep_origin complement(1381..1687)
/label="f1_origin"
promoter 1766..1794
/label="AmpR_promoter"
misc_feature complement(1860..1880)
/label="pBABE_3_primer"
misc_feature complement(1866..2081)
/label="SV40_enhancer"
promoter 1878..2146
/label="SV40_promoter"
rep_origin 2045..2122
/label="SV40_origin"
misc_feature 2107..2126
/label="SV40pro_F_primer"
CDS 2229..3023
/label="ORF frame 3"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
EHQGLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
gene 2232..3020
/label="NeoR/KanR (variant)"
/gene="NeoR/KanR (variant)"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
EHQGLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
CDS complement(2538..3074)
/label="ORF frame 3"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
terminator 3198..3467
/label="TK_PA_terminator"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
rep_origin 3615..4234
/label="pBR322_origin"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
ORIGIN
1 ATGCATTAGT TATTAATAGT AATCAATTAC GGGGTCATTA GTTCATAGCC CATATATGGA
61 GTTCCGCGTT ACATAACTTA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC TGACCGCCCA ACGACCCCCG
121 CCCATTGACG TCAATAATGA CGTATGTTCC CATAGTAACG CCAATAGGGA CTTTCCATTG
181 ACGTCAATGG GTGGAGTATT TACGGTAAAC TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA
241 TATGCCAAGT ACGCCCCCTA TTGACGTCAA TGACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCATTATGC
301 CCAGTACATG ACCTTATGGG ACTTTCCTAC TTGGCAGTAC ATCTACGTAT TAGTCATCGC
361 TATTACCATG GTGATGCGGT TTTGGCAGTA CATCAATGGG CGTGGATAGC GGTTTGACTC
421 ACGGGGATTT CCAAGTCTCC ACCCCATTGA CGTCAATGGG AGTTTGTTTT GGCACCAAAA
481 TCAACGGGAC TTTCCAAAAT GTCGTAACAA CTCCGCCCCA TTGACGCAAA TGGGCGGTAG
541 GCGTGTACGG TGGGAGGTCT ATATAAGCAG AGCTGGTTTA GTGAACCGTC AGATCCGCTA
601 GCGATTACGC CAAGCTCGAA ATTAACCCTC ACTAAAGGGA ACAAAAGCTG GAGCTCCACC
661 GCGGTGGCGG CCGCCATGGA GCAGAAACTC ATCTCTGAAG AGGATCTGAG CCCGGGCGGA
721 TCCCCCGGGC TGCAGGAATT CGATATCAAG CTTATCGATA CCGTCGACCT CGAGGGGGGG
781 CCCGGTACCT TAATTAATTA AGGTACCAGG TAAGTGTACC CAATTCGCCC TATAGTGAGT
841 CGTATTACAA TTCACTCGAT CGCCCTTCCC AACAGTTGCG CAGCCTGAAT GGCGAATGGA
901 GATCCAATTT TTAAGTGTAT AATGTGTTAA ACTACTGATT CTAATTGTTT GTGTATTTTA
961 GATTCACAGT CCCAAGGCTC ATTTCAGGCC CCTCAGTCCT CACAGTCTGT TCATGATCAT
1021 AATCAGCCAT ACCACATTTG TAGAGGTTTT ACTTGCTTTA AAAAACCTCC CACACCTCCC
1081 CCTGAACCTG AAACATAAAA TGAATGCAAT TGTTGTTGTT AACTTGTTTA TTGCAGCTTA
1141 TAATGGTTAC AAATAAAGCA ATAGCATCAC AAATTTCACA AATAAAGCAT TTTTTTCACT
1201 GCATTCTAGT TGTGGTTTGT CCAAACTCAT CAATGTATCT TAACGCGTAA ATTGTAAGCG
1261 TTAATATTTT GTTAAAATTC GCGTTAAATT TTTGTTAAAT CAGCTCATTT TTTAACCAAT
1321 AGGCCGAAAT CGGCAAAATC CCTTATAAAT CAAAAGAATA GACCGAGATA GGGTTGAGTG
1381 TTGTTCCAGT TTGGAACAAG AGTCCACTAT TAAAGAACGT GGACTCCAAC GTCAAAGGGC
1441 GAAAAACCGT CTATCAGGGC GATGGCCCAC TACGTGAACC ATCACCCTAA TCAAGTTTTT
1501 TGGGGTCGAG GTGCCGTAAA GCACTAAATC GGAACCCTAA AGGGAGCCCC CGATTTAGAG
1561 CTTGACGGGG AAAGCCGGCG AACGTGGCGA GAAAGGAAGG GAAGAAAGCG AAAGGAGCGG
1621 GCGCTAGGGC GCTGGCAAGT GTAGCGGTCA CGCTGCGCGT AACCACCACA CCCGCCGCGC
1681 TTAATGCGCC GCTACAGGGC GCGTCAGGTG GCACTTTTCG GGGAAATGTG CGCGGAACCC
1741 CTATTTGTTT ATTTTTCTAA ATACATTCAA ATATGTATCC GCTCATGAGA CAATAACCCT
1801 GATAAATGCT TCAATAATAT TGAAAAAGGA AGAATCCTGA GGCGGAAAGA ACCAGCTGTG
1861 GAATGTGTGT CAGTTAGGGT GTGGAAAGTC CCCAGGCTCC CCAGCAGGCA GAAGTATGCA
1921 AAGCATGCAT CTCAATTAGT CAGCAACCAG GTGTGGAAAG TCCCCAGGCT CCCCAGCAGG
1981 CAGAAGTATG CAAAGCATGC ATCTCAATTA GTCAGCAACC ATAGTCCCGC CCCTAACTCC
2041 GCCCATCCCG CCCCTAACTC CGCCCAGTTC CGCCCATTCT CCGCCCCATG GCTGACTAAT
2101 TTTTTTTATT TATGCAGAGG CCGAGGCCGC CTCGGCCTCT GAGCTATTCC AGAAGTAGTG
2161 AGGAGGCTTT TTTGGAGGCC TAGGCTTTTG CAAAGATCGA TCAAGAGACA GGATGAGGAT
2221 CGTTTCGCAT GATTGAACAA GATGGATTGC ACGCAGGTTC TCCGGCCGCT TGGGTGGAGA
2281 GGCTATTCGG CTATGACTGG GCACAACAGA CAATCGGCTG CTCTGATGCC GCCGTGTTCC
2341 GGCTGTCAGC GCAGGGGCGC CCGGTTCTTT TTGTCAAGAC CGACCTGTCC GGTGCCCTGA
2401 ATGAACTGCA AGACGAGGCA GCGCGGCTAT CGTGGCTGGC CACGACGGGC GTTCCTTGCG
2461 CAGCTGTGCT CGACGTTGTC ACTGAAGCGG GAAGGGACTG GCTGCTATTG GGCGAAGTGC
2521 CGGGGCAGGA TCTCCTGTCA TCTCACCTTG CTCCTGCCGA GAAAGTATCC ATCATGGCTG
2581 ATGCAATGCG GCGGCTGCAT ACGCTTGATC CGGCTACCTG CCCATTCGAC CACCAAGCGA
2641 AACATCGCAT CGAGCGAGCA CGTACTCGGA TGGAAGCCGG TCTTGTCGAT CAGGATGATC
2701 TGGACGAAGA ACATCAGGGG CTCGCGCCAG CCGAACTGTT CGCCAGGCTC AAGGCGAGCA
2761 TGCCCGACGG CGAGGATCTC GTCGTGACCC ATGGCGATGC CTGCTTGCCG AATATCATGG
2821 TGGAAAATGG CCGCTTTTCT GGATTCATCG ACTGTGGCCG GCTGGGTGTG GCGGACCGCT
2881 ATCAGGACAT AGCGTTGGCT ACCCGTGATA TTGCTGAAGA ACTTGGCGGC GAATGGGCTG
2941 ACCGCTTCCT CGTGCTTTAC GGTATCGCCG CTCCCGATTC GCAGCGCATC GCCTTCTATC
3001 GCCTTCTTGA CGAGTTCTTC TGAGCGGGAC TCTGGGGTTC GAAATGACCG ACCAAGCGAC
3061 GCCCAACCTG CCATCACGAG ATTTCGATTC CACCGCCGCC TTCTATGAAA GGTTGGGCTT
3121 CGGAATCGTT TTCCGGGACG CCGGCTGGAT GATCCTCCAG CGCGGGGATC TCATGCTGGA
3181 GTTCTTCGCC CACCCTAGGG GGAGGCTAAC TGAAACACGG AAGGAGACAA TACCGGAAGG
3241 AACCCGCGCT ATGACGGCAA TAAAAAGACA GAATAAAACG CACGGTGTTG GGTCGTTTGT
3301 TCATAAACGC GGGGTTCGGT CCCAGGGCTG GCACTCTGTC GATACCCCAC CGAGACCCCA
3361 TTGGGGCCAA TACGCCCGCG TTTCTTCCTT TTCCCCACCC CACCCCCCAA GTTCGGGTGA
3421 AGGCCCAGGG CTCGCAGCCA ACGTCGGGGC GGCAGGCCCT GCCATAGCCT CAGGTTACTC
3481 ATATATACTT TAGATTGATT TAAAACTTCA TTTTTAATTT AAAAGGATCT AGGTGAAGAT
3541 CCTTTTTGAT AATCTCATGA CCAAAATCCC TTAACGTGAG TTTTCGTTCC ACTGAGCGTC
3601 AGACCCCGTA GAAAAGATCA AAGGATCTTC TTGAGATCCT TTTTTTCTGC GCGTAATCTG
3661 CTGCTTGCAA ACAAAAAAAC CACCGCTACC AGCGGTGGTT TGTTTGCCGG ATCAAGAGCT
3721 ACCAACTCTT TTTCCGAAGG TAACTGGCTT CAGCAGAGCG CAGATACCAA ATACTGTCCT
3781 TCTAGTGTAG CCGTAGTTAG GCCACCACTT CAAGAACTCT GTAGCACCGC CTACATACCT
3841 CGCTCTGCTA ATCCTGTTAC CAGTGGCTGC TGCCAGTGGC GATAAGTCGT GTCTTACCGG
3901 GTTGGACTCA AGACGATAGT TACCGGATAA GGCGCAGCGG TCGGGCTGAA CGGGGGGTTC
3961 GTGCACACAG CCCAGCTTGG AGCGAACGAC CTACACCGAA CTGAGATACC TACAGCGTGA
4021 GCTATGAGAA AGCGCCACGC TTCCCGAAGG GAGAAAGGCG GACAGGTATC CGGTAAGCGG
4081 CAGGGTCGGA ACAGGAGAGC GCACGAGGGA GCTTCCAGGG GGAAACGCCT GGTATCTTTA
4141 TAGTCCTGTC GGGTTTCGCC ACCTCTGACT TGAGCGTCGA TTTTTGTGAT GCTCGTCAGG
4201 GGGGCGGAGC CTATGGAAAA ACGCCAGCAA CGCGGCCTTT TTACGGTTCC TGGCCTTTTG
4261 CTGGCCTTTT GCTCACATGT TCTTTCCTGC GTTATCCCCT GATTCTGTGG ATAACCGTAT
4321 TACCGCC
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文献和实验质,小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时,通过洗杂步骤,即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质,通过改变缓冲液的条件,如pH,或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢?仅达到所需的质量量级,如毫克级(或克级)即可满足吗? 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要,比如,就蛋白的生物活性和纯度而言,通常会有所要求。 以下我们来讨论并且比较2种技术: His-tag系统和Strep-tag®系统,都使用了亲和层析法来纯化
Strep-tag®技术是亲和纯化重组蛋白的常用工具,它基于自然界中最强的非共价相互作用之一,即生物素与链霉亲和素的相互作用。该纯化系统的突出特点是纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统,对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助,因此近些年来脱颖而出。 本文将从以下方面介绍Strep-tag®技术: 标签介绍 纯化原理 标签-配体 纯化步骤 系统特点 标签介绍 目前有2种广泛使用的Strep标签: 它们分别是: Strep-tag®II 8 aa小标签(Trp-Ser
1. CUT&Tag 适用于什么物种?如果需要做植物 CUT&Tag ,需要怎么操作? CUT&Tag 适用于哺乳动物细胞的蛋白-DNA 互作研究,酵母、植物等细胞需要经过(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验。CUT&Tag 在哺乳动物细胞系上的应用比较成熟,动物组织经过处理得到悬浮单个细胞同样可以进行实验。植物进行 CUT&Tag 操作可以参照 Low-input chromatin profiling in Arabidopsis
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