质粒大量抽提试剂盒

 质粒大量抽提试剂盒(Plasmid Maxi Preparation Kit, Plasmid Maxiprep Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行大量质粒快速抽提的离心柱式试剂盒。
      本试剂盒适用于常用的EndA-菌株DH5A、JM109和XL-1 blue等。对于EndA+菌株如JM110、BL21 (DE3)、TG1和HB101
等，可以顺利完成质粒抽提，但从EndA+菌株中抽提获得的质粒会有轻微的核酸酶污染，如果在内切酶缓冲液中37℃孵育1小时会导致质粒全部降解。从EndA+菌株中抽提质粒时推荐使用的D0007S/D0007M 质粒小量抽提试剂盒(通用型)、D0020 质粒中量抽提试剂盒(通用型)和D0028 质粒大量抽提试剂盒(通用型)。
      野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I，能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA，如果endA突变失活，其基因型会被标注为endA1，相应的突变菌株被称为EndA-菌株，而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒，微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化，导致容易降解。
      本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，6个样品只需不足90分钟即可完成。
      每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限大于500微克。每个纯化柱可用于抽提100毫升左右用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。