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- 2025年07月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
pNLF1-secN [CMV/Hygro]
- 库存：
大量
- 供应商：
钰博生物
- 规格：
1ug/5ug
pNLF1-secN [CMV/Hygro]
载体基本信息
| 出品公司: | Ybscience |
|---|---|
| 载体名称: | pNLF1-secN ; pNLF1-secN [CMV/Hygro] |
| 质粒类型: | 哺乳动物载体；NanoLuc素酶报告载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | -- |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | CMV IE |
| 载体大小: | 6005 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | NanoLuc |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 潮霉素（Hygromycin） |
| 克隆菌株: | TOP10等常规菌株 |
| 宿主细胞（系）: | 常规哺乳动物细胞等 |
| 备注: | pNLF1-secN [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白；NanoLuc萤光素酶（Nluc）更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）。 |
| 稳定性: | 瞬表达或稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
载体质粒图谱和多克隆位点信息
pNLF1-secN [CMV/Hygro] Vector sequence reference points: Base pairs 6005 CMV immediate early enhancer/promoter 1–742 Chimeric intron 857–989 T7 RNA polymerase promoter 1033–1052 secNanoLuc® protein coding region 1067–1663 Linker 1664–1675 Multiple cloning region 1676–1751 SV40 late poly(A) region 1814–2035 SV40 early enhancer/promoter 2134–2546 Synthetic hygromycin (Hygr) coding region 2577–3614 Synthetic poly(A) signal 3638–3686 β-lactamase (Ampr) coding region 3947–4807 ColE1-derived plasmid replication origin 4962–4998
载体简介
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-secN 更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）的 NanoLuc萤光素酶（Nluc）非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛：作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像（BLI）探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移（BRET）研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。 NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白；有两类形式载体可供选择： pNLF 载体系列：产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法（多克隆位点）将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 pF 载体系列：使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白；Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法，基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI，可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列，快速、高效和高保真。 特点 - 优点 轻松定量蛋白丰度变化：使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样，来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号，进而检测细胞内蛋白水平。 生物相关性更高：NanoLuc 报告基因光信号更强，内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到，可避免过度表达造成的假象。 使蛋白的细胞内动态变化可视化：NanoLuc 报告基因光信号更强，缩短了成像曝光时间，无需反复激发样本，从而降低了激发造成的细胞毒性反应。 改进 BRET 研究技术：NanoLuc 拥有更强的光信号，蓝移的发射光谱，因而与荧光受体的光谱交叉更少，信噪比更佳，动态范围更宽。 灵活的克隆选择：可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡：所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。 应用 化合物筛选 蛋白: 蛋白相互作用 蛋白: 小分子相互作用 生物发光成像 蛋白稳定性研究
载体序列
LOCUS KF811459 6005 bp DNA circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION SecN CMV-Hyg Vector pNLF1, complete sequence.
ACCESSION KF811459
VERSION KF811459.1 GI:576890577
KEYWORDS .
SOURCE secN CMV-Hyg Vector pNLF1
ORGANISM secN CMV-Hyg Vector pNLF1
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1 (bases 1 to 6005)
AUTHORS McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6005
/organism="secN CMV-Hyg Vector pNLF1"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:1454403"
regulatory 1..6005
/regulatory_class="promoter"
/note="CMV promoter"
intron 857..989
/note="chimeric"
regulatory 1033..1052
/regulatory_class="promoter"
/note="T7 promoter"
CDS 1067..>1663
/note="N-terminus"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="NanoLuc luciferase"
/protein_id="AHH41365.1"
/db_xref="GI:576890580"
/translation="MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVFTLEDFVGDWRQTA
GYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQRIVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQ
IEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDGVTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGT
LWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVTGWRLCERILA"
misc_feature 1067..1153
/note="IL6 signal sequence"
misc_feature 1664..1675
/note="N-terminal NanoLuc linker"
misc_feature 1676..1751
/note="multiple cloning region"
misc_feature 1676..1683
/note="SgfI site"
misc_feature 1695..1700
/note="EcoICRI site"
regulatory 1814..2035
/regulatory_class="polyA_signal_sequence"
/note="SV40 late polyA signal"
regulatory 2134..2546
/regulatory_class="promoter"
/note="SV40 early enhancer/promoter"
gene 2577..3614
/gene="hygR"
CDS 2577..3614
/gene="hygR"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="hygromycin resistance protein"
/protein_id="AHH41364.1"
/db_xref="GI:576890579"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR
GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
TRPRAKEVGRV"
regulatory 3638..3686
/regulatory_class="polyA_signal_sequence"
/note="synthetic polyA signal"
gene 3947..4807
/gene="ampR"
CDS 3947..4807
/gene="ampR"
/function="resistance to ampicillin"
/note="ampicillin-resistance protein"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="beta-lactamase"
/protein_id="AHH41363.1"
/db_xref="GI:576890578"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
rep_origin 4962..4998
/note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN
1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcaaa gccaccatga actccttctc
1081 cacaagcgcc ttcggtccag ttgccttctc cctgggcctg ctcctggtgt tgcctgctgc
1141 cttccctgcc ccagtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg
1201 ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg
1261 ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga
1321 catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa
1381 aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg
1441 cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga
1501 aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa
1561 caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat
1621 caacggagtg accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgggctcga gcggcgcgat
1681 cgcttccgaa ttcagagctc aaccgcggat atctagattt gggcccaatt cctgcaggat
1741 tttgcggccg cttgctgagt tggctgctgc caccgctgag caataactag cataacccct
1801 tggccgcttc gagcagacat gataagatac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga
1861 atgcagtgaa aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc
1921 attataagct gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt
1981 cagggggaga tgtgggaggt ttttttaagc aagtaaaacc tctacaaatg tggtaaaatc
2041 gaattttaac aaaatattaa cgcttacaat ttcctgatgc ggtattttct ccttacgcat
2101 ctgtgcggta tttcacaccg catacgcgga tctgcgcagc accatggcct gaaataacct
2161 ctgaaagagg aacttggtta ggtaccttct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt
2221 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc
2281 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
2341 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc
2401 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta
2461 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct
2521 tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcgattcttc tgacactagc gccaccatga
2581 agaagcccga actcaccgct accagcgttg aaaaatttct catcgagaag ttcgacagtg
2641 tgagcgacct gatgcagttg tcggagggcg aagagagccg agccttcagc ttcgatgtcg
2701 gcggacgcgg ctatgtactg cgggtgaata gctgcgctga tggcttctac aaagaccgct
2761 acgtgtaccg ccacttcgcc agcgctgcac tacccatccc cgaagtgttg gacatcggcg
2821 agttcagcga gagcctgaca tactgcatca gtagacgcgc ccaaggcgtt actctccaag
2881 acctccccga aacagagctg cctgctgtgt tacagcctgt cgccgaagct atggatgcta
2941 ttgccgccgc cgacctcagt caaaccagcg gcttcggccc attcgggccc caaggcatcg
3001 gccagtacac aacctggcgg gatttcattt gcgccattgc tgatccccat gtctaccact
3061 ggcagaccgt gatggacgac accgtgtccg ccagcgtagc tcaagccctg gacgaactga
3121 tgctgtgggc cgaagactgt cccgaggtgc gccacctcgt ccatgccgac ttcggcagca
3181 acaacgtcct gaccgacaac ggccgcatca ccgccgtaat cgactggtcc gaagctatgt
3241 tcggggacag tcagtacgag gtggccaaca tcttcttctg gcggccctgg ctggcttgca
3301 tggagcagca gactcgctac ttcgagcgcc ggcatcccga gctggccggc agccctcgtc
3361 tgcgagccta catgctgcgc atcggcctgg atcagctcta ccagagcctc gtggacggca
3421 acttcgacga tgctgcctgg gctcaaggcc gctgcgatgc catcgtccgc agcggggccg
3481 gcaccgtcgg tcgcacacaa atcgctcgcc ggagcgcagc cgtatggacc gacggctgcg
3541 tcgaggtgct ggccgacagc ggcaaccgcc ggcccagtac acgaccgcgc gctaaggagg
3601 taggtcgagt ttagactcta gccatcacga tggccgcaat aaaatatctt tattttcatt
3661 acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagcgata aggatcctct ttgcgcttgc
3721 gttttccctt gtccagatag cccagtagct gacattcatc cggggtcagc accgtttctg
3781 cggactggct ttctacgtaa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
3841 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag
3901 acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca
3961 tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc
4021 agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat
4081 cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc
4141 aatgatgagc actttcaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg
4201 gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc
4261 agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat
4321 aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca actatcggag gaccgaagga
4381 gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc
4441 ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc
4501 aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt
4561 aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc
4621 tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc
4681 agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca
4741 ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca
4801 ttggtaattc gaaatgaccg accaagcgac gcccaaccgg tatcagctca ctcaaaggcg
4861 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
4921 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
4981 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
5041 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
5101 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
5161 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
5221 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
5281 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
5341 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
5401 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
5461 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
5521 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggattt caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
5581 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
5641 aggatcttca cctagatcct tttatagtcc ggaaatacag gaacgcacgc tggatggccc
5701 ttcgctggga tggtgaaacc atgaaaaatg gcagcttcag tggattaagt gggggtaatg
5761 tggcctgtac cctctggttg cataggtatt catacggtta aaatttatca ggcgcgattg
5821 cggcagtttt tcgggtggtt tgttgccatt tttacctgtc tgctgccgtg atcgcgctga
5881 acgcgtttta gcggtgcgta caattaaggg attatggtaa atccacttac tgtctgccct
5941 cgtagccatc gagataaacc gcagtactcc ggccacgatg cgtccggcgt agaggatcga
6001 gatct
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文献和实验相关实验
的基因可能有启动子喜好，一般情况下CMV启动子就可以了，如果不行可以试一下E2F1,AP-1等别的启动子的载体，希望建议对你有用。 whm5869 pharmaceutic wrote: 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题，最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同的基因可能有启动子喜好，一般情况下CMV启动子就可以了，如果不行可以试一下E2F1,AP-1等别的启动子的载体，希望建议对你有用。
1.常用载体分类：2,常用载体元件介绍：(1) 启动子：启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子；特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG，CMV，EF1a，PGK等，还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子；常用特异性启动子如成熟神经元特异性启动子hSyn，投射神经元特异性启动
9K(AMP+、ZEO+） 5’AOX/a-factor 3’AOX pPICZa 5'AOX/PPICZa-F 3'AOX pPROEXHTA M13R(-48) 无反向引物 pQE30or40 pQE30-F pQE-R: pRSET T7 T7TER pSilencer3.1-H1 hygro M13F(-47) 3.0REV pSILENCEV2.0-U6 T7 2.0REV pSK01-T M13F M13R pSK-CMV(KAN+) T7 T3 pSP72 T7 SP
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