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文献和实验本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。 大肠杆菌具有两个显著特征:操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养,它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌有众多的优点,但并非每一种基因都能在其中有效表达。 这归因于每种基因都有其独特的结构、mRNA的稳定性和翻译效率、蛋白质折叠的难易程度、宿主细胞蛋白酶对蛋白质的降解、外源基因和E.coli 在密码子利用上的主要
大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
双酶切后,嵌入表达载体pTrc-99B的NcoI和HindIII两个酶切位点间的切口内。得到的LeuRS 6个变种酶基因的正确性用DNA测序证实。 2. LeuRS及其变种酶基因的表达和纯化 1) 将含有LeuRS及其六个变种酶LeuRS-E292K,LeuRS-E292F,LeuRS-E292S,LeuRS-E292D,LeuRS-E292Q,LeuRS-E292A的基因的重组质粒转化到在大肠杆菌菌株TG1中,挑选含有正确质粒的转化子至5 mL氨节
事实,但对把这些于无脊椎动物所观察到的情况普遍推及到脊椎动物方面,而 H. E. Ziegler和 A. W. Goette根据种种研究的结果提出了反证。对于两栖类有尾类的 W. Vogt( 1929)的精密的研究实验,认定体腔说是完全不能成立的。另外把现在有关羊膜类的胚胎学见解使之与体腔说统一起来也几乎是不可能的。
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