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- 2025年08月11日
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting
前期记录CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 目标基因背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- sgRNA 及引物设计CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 构建 sgRNA+Cas9 载体golden gate 构建好载体，酶切验证成功293FT 细胞转染验证1. sgRNA+pSpCas9 载体用 lipofectamine 3000 转染至 293FT 细胞（按照转染试剂的说明书走），确保转染效率> 70
之前转染HEK293作为预实验，已经用WB证明有效，你之后的wb有没阳性对照呢或者说用HEK293作为对照呢 birkin chenhaombb wrote: 你用的什么载体啊？稳定转染的？怎么用G418筛选啊，费时费力，直接病毒转 用的pCMV6Entry，已经是慢病毒载体了……就是因为这种细胞转染率太低（据师姐说大概15%）不得已才做稳定转染，想说看看能不能让转染率上来一点
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检测，投入 50ng 人基因组 DNA ，各取 1μl 转座子进行 DNA 片段化（10 min），扩增后使用 2% 琼脂糖凝胶电泳检测产量以及分布情况。 图 5.转座子活性检测结果图 结果显示：Vazyme pA-Tn5 融合酶切割 DNA 活性很高，文库产量显著高于 N* 公司同类产品。 B、活细胞 CUT&Tag 实验 投入 10,000 个 HEK293 细胞，分别使用 Vazyme #TD902 与 N* 公司同类产品，按照各自说明书推荐的反应体系进行 CUT&Tag
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