- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM405Ra01
- 2026年03月04日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Phosphofructokinase, Muscle (PFKM)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验意识。 想了解 Aβ，我们还要从它的前体蛋白 APP 说起。 APP 全称淀粉样前体蛋白，英文名称为 Amyloid Precursor Protein。人类的 APP 基因位于 21 号染色体长臂，包含至少 18 个外显子。APP 分布广泛，mRNA 及其蛋白在脑、胸腺、心、肌肉、肺、肾脏、脂肪组织、肝、脾、皮肤及肠道等组织均有表达 ［1］。APP 属Ⅰ型跨膜糖蛋白，分子量约 110～130kD，具有较大的膜外 (氨基端) 结构域和较小的胞质尾区 (胞内羧基端)［1］。APP 的胞外
度，维持存活率， 降低细胞死亡速率, 持续获得高产率蛋白的目的。当产物蛋白对细胞有抑制时， 阶段培养尤见优势。具体说来，可以用以下方法。 2. 1. 2 pH 值阶段培养 对大多数动物细胞， 培养液中合适的pH为7. 2—7. 4。低于6. 8 或高于7. 6 对细胞的生长都不利。近年来, 对胞内pH 的研究比较活跃。实验发现胞内pH 对细胞的代谢影响很大，胞内pH 降低0. 2 个单位，就足以使磷酸果糖激酶失活，抑制糖酵解途径, 使细胞的生长受阻；而胞内pH 升高0. 2 个单位,可以提高
，检测的均是抗HIV IgG抗体。第一代EIA试剂采用的是HIV病毒溶解物作为靶抗原，而第二代采用的是代表HIV衣壳和包膜的重组蛋白。目前在美国市场应用最多的用于HIV筛查的仍是第二代EIA试剂。 第三代产品除检测IgG抗体为还能检测IgM抗体。它采用的是“双抗原夹心法”，其中一个抗原包背于固相，另一个抗原与诸如碱性磷酸酶或辣根过氧化酶等结合。另外，第三代EIA试剂还具有检测特定HIV亚型的能力，比如前两代产品所不能检出的HIV-10群或HIV-2。 第四代产品除了能够检测IgM或IgG
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