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- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM119Bo01
- 2025年07月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Cluster Of Differentiation 40 Ligand (CD40L)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验白细胞分化抗原及其功能 CD40L 即CDl54分子，属于TNFSF成员，为Ⅱ型膜蛋白。 人CD40L主要表达在活化的CD4+T细胞以及部分CD8+T细胞和YaT细胞。此外，CD40L还表达于活化的嗜碱粒细胞、肥大细胞、NK细胞、某些单核细胞以及活化B细胞。静止淋巴细胞不表达CD40L。CD40L往往以三聚体形式结合三聚体的CD40分子(TNFR超家族成员)发挥生物学作用，即传递B细胞活化的第二信号(见第九章)。缺少第二
CD40 分子 CD40 常用单克隆抗体或代号： G28- 5,EA- 5 主要表达细胞： B,M,FDC,并指细胞,上皮 [B] 分子质量(kDa)和结构： gp50(TNFR- SF) 功 能： B细胞生长、分化和记忆细胞产生,配体为CD40L,T- B相互作用 CD40 Plays a central role in regulating cell-mediated
CD40 ／ CD22 白细胞分化抗原及其功能 CD40 属于TNFR-SF，胞膜外区有4个富含牛胱氨酸重复序列(图6―2)，表达于APC细胞，以及某些上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、淋巴样并指细胞、FDC以及活化的单核细胞。浆细胞不表达CD40分子。 CD40结合CD40L(CDl54)，胞质区Thr234是CD40介导信号转导关键的氨基酸残基。CD40-CD40L相互作用是B细胞活化中第二信号的主要来源，而且对于T
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