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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 英文名:
RNase-Free Tris-HCl Solution
- 库存:
288
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)价格厂家是高品质的生化试剂产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)等生化试剂产品请联系我司咨询订购。
名称:Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)价格厂家
规格:250mL
产地:国产|进口
编号:BTN60704
品牌:百奥莱博
更多有关Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)价格厂家的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·20%CTAB溶液(DNA级)
编号:BTN101107
规格:250mL
·Tricine-SDS PAGE配胶液
编号:BTN81225
英文名称:Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer
规格:250mL
本产品专门用于配制Tricine-SDS-PAGE胶,其浓度为3×,配胶时即开即用,非常方便。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
·Cre重组酶
编号:BTN130665
英文名称:Cre Recombinase
规格:50U
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列,其两端是两个13bp的反向重复序列,中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同,两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割,而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。

产品用途:
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| Cre重组酶,1000 U/mL | 50μl |
| 10× Reaction Buffer | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在50μl反应体系,37℃条件下,30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。
热灭火:70℃加热10分钟。
使用举例:
1.按下列组份配制反应液:
| DNA溶液 | - |
| 10×Reaction Buffer | 5μl |
| Cre重组酶 | 1μl(1U) |
| 超纯水 | Up to 50μL |
2.37℃孵育30分钟。
3.70℃孵育10分钟,灭活酶活。
注意事项:
1.建议进行琼脂糖凝胶电泳前,将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2.由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程,用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少,故*化乙锭染色后呈现微弱条带,同时伴有底物染色强度相应减弱。
3.延长温育时间不会提高重组效率,相反,还可能导致大分子量重组产物的生成。
4.反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物,从而抑制重组反应。
Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)价格厂家关键词:不含RNase,RNase-Free Tris-HCl Solution,BTN60704,1M,pH6.5,Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
·Oligo快速复性液
编号:BTN130204
英文名称:Oligo Rapid Renaturing Solution
规格:1mL
本产品是精心优化的、专门用于Oligo快速复性的试剂,广泛用于以单链Oligo为材料制备Adaptor、Linker和其他双链Oligo分子,跟各种后续的分子生物学实验兼容,包括文库构建、抑制性差减杂交、AFLP等。本产品即可用于DNA-DNA Oligo复性,也适用于RNA-RNA Oligo和DNA-RNAOligo复性。还适用于带修饰碱基的Oligo的复性。
储存条件:低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。
·蜗牛酶干粉
编号:BTN100917
英文名称:Snail enzyme,powder
规格:5g
本品是从蜗牛(Helix pomatia)的嗦囊和消化道中制备的混合酶,它含有β-glucoronidase、endo-β-glucanase、arylsulphatase、纤维素酶,果胶酶,淀粉酶,蛋白酶等20多种酶,呈褐色结晶粉末。可以用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球制备等。
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:(处理酵母细胞举例)
1.配制山梨醇缓冲液(10mL):1.82g山梨醇、0.042g柠檬酸*,用10mL pH5.8的磷酸*缓冲液溶解,涡旋震荡混匀,超净台中,滤器过滤除菌。
2.取5mL 山梨醇缓冲液加入到装有1g蜗牛酶的棕色瓶中,轻轻摇动混匀,务必使蜗牛酶完全溶解,使用之前用枪头挑一下瓶底,看是否有未溶解的酶,若有沉淀,则继续摇动或用枪头吹吸,使其溶解,得到的溶液为浓度是200mg/mL的蜗牛酶溶液。
3.取3-5mL酵母细胞,200μL无菌水洗涤菌体(吹吸重悬),室温10000rpm离心1min,弃上清。重复洗涤2-3次。
4.将酵母细胞重悬于300-500μL巯基化合物中,32℃水浴15-30min。期间轻轻颠倒离心管两三次。
5.室温10000rpm离心1min,弃上清。将沉淀重悬浮于500μl山梨醇缓冲液中。
6.按照每克细胞30-40mg蜗牛酶的比例,加适量体积的第2步配制的蜗牛酶溶液到酵母细胞溶液中,37℃保温1小时。(破壁率一般达90%以上。)
7.4℃保存或直接用于核酸、蛋白质提取制备。
附:巯基化合物配制方法
巯基化合物(0.04M EDTA和0.14M β-巯基乙醇)(30mL):
| 试剂 | 剂量 |
| 0.5M EDTA | 2.4ml |
| 巯基乙醇(分析纯ρ=1.11439g/mL) | 294μl |
| 无菌水 | 27.3ml |
Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)价格厂家关键词:不含RNase,RNase-Free Tris-HCl Solution,BTN60704,1M,pH6.5,Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
我公司生化试剂产品种类丰富,涵盖溶剂、培养基、*基酸及其衍生物、组织学试剂、电泳试剂、核苷酸及其衍生物、糖类、纯化试剂、分子生物学用试剂、抗生素、生物缓冲试剂、染色剂、Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)等。我公司作为一家以客户为中心的生产厂家和全球分销商,生产经营品种齐全的高质量化学品,实验室耗品和器材。在百奥莱博,质量是我们第一关注的要点。欢迎咨询选购!
·印迹膜抗体稀释液
编号:BTN81208
英文名称:Antibody Dilution Buffer
规格:250mL
本产品用于稀释Western Blot抗体,即开即用,方便快捷。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 抗体稀释液成分一 | 100ml |
| 抗体稀释液成分二 | 0.5g |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、转膜(湿法电转移,本产品不含相关试剂)
1.制备湿法电转液:将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液,用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2.根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3.将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
注意:最好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上,只让膜下层不转移液接触,通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中,否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4.在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5.在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
注意:每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸绝对不能相互接触,否则电转移时会发生短路,烧坏装置。
6.合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向,转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负;转印带正电荷的蛋白质时,电极方向是膜负胶正),然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7.插上电极,一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
注意:一定要检查电流的大小,电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间,对于小分子量的蛋白,转膜时最好垫2张或更多张膜(最多可10 张),即使白质已经转过了第一张膜,还会在其它膜上检测到;对于大分子量的蛋白,转膜时电压要高一点,时间也要延长一点,开始最好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低,可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8.终止转移后,取出膜,幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。
二、封膜(本产品不含相关试剂)
1.将膜转移至杂交袋中,加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2.室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。
三、与一抗二抗结合
1.用5mL Western抗体稀释液(配制方法:将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中,溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用,最佳稀释倍数跟一抗效价相关,需摸索)。
2.剪开杂交袋的一角,倒去封膜液,加入5mL新鲜稀释的一抗溶液,加热密封杂交袋开口。
3.室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4.用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。最佳稀释倍数跟二抗效价相关,需摸索)。
5.剪开杂交袋的一角,倒去一抗溶液(可留存),加入5mL新鲜稀释的二抗溶液,加热密封杂交袋开口。
6.室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟,也可过夜孵育。
7.剪开杂交袋的一角,倒去二抗溶液(可留存)。
8.剪开杂交袋,用镊子取出膜,用Western洗膜液在器皿中洗3次,每次10分钟。
9.根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。
四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗,本产品A型,本产品不含相关试剂)
1.将膜平放,在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B,铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2.置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分钟,直至深蓝色条带出现。
3.用镊子夹起膜,放入去离子水中洗膜3次终止反应,每次30分钟。
4.空气中晾干后照相保存。
注意:膜显色后的颜色在数小时后将会褪色,不能永久存在,故需要及时照相。
五、AP显色检测(对AP标记的二抗,本产品B型,本产品不含相关试剂)
1.用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2.将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中,每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法:将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3.室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4.显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应,每次30分钟。
5.用吸水纸吸干膜上的水分,避光干燥保存或在一周内照相。
六、Western抗体清除剂(说明:此处理可能会使蛋白质失去某些表位,本产品不含相关试剂)
1.将膜浸泡在Western抗体清除剂中,70℃摇晃孵育30分钟,去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次,每次10分钟。
2.膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。
Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)等级划分:
我国的试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分,共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。
(1)优级纯(GR),又称一级品或保证试剂,99.8%,这种试剂纯度最高,杂质含量最低,适合于重要精密的分析工作和科学研究工作,使用绿色瓶签。
(2)分析纯(AR),又称二级试剂,纯度很高,99.7%,略次于优级纯,适合于重要分析及一般研究工作,使用红色瓶签。
(3)化学纯(CP),又称三级试剂,≥ 99.5%,纯度与分析纯相差较大,适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。
(4)实验试剂(LR),又称四级试剂。
我公司位于北京市海淀区,是一家专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材研发、销*(代"售")、服务为一体的生物科技公司,公司主要经营的进口品牌包括Sigma,Invitrogen,Roche,Abcam,BD, R&D,GE,Amresco,Merck等;产品涉及化工原料、生化试剂、分子克隆相关试剂、细胞培养及检测常用试剂、实验室常用耗材等。百奥莱博秉承博采众长、诚信为本、德行天下的宗旨服务于客户。公司合作单位及客户包括各大医院、科研机构、大专院校、制药单位、医学检验单位、卫生防疫、生物技术公司、食品单位等诸多领域,正逐步成长为一流的生化试剂和耗材供应商。 我们将一如既往的为您提供优质的产品和完善的售后服务。
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