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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃保存
- 保质期:
1年
- 英文名:
Staphylococcal protein A
- 库存:
686
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京BTN131079型重组蛋白A促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京BTN131079型重组蛋白A促销
品牌:百奥莱博
编号:BTN131079
英文名:Staphylococcal protein A
产地:国产|进口
规格:1mg
本品为重组蛋白A,分子量32kD,纯度>90%,带His标签。
储存条件:-20℃保存,有效期1年。
除北京BTN131079型重组蛋白A促销外,我公司正在打折促销以下产品:
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北京BTN131079型重组蛋白A促销关键词:Staphylococcal protein A,BTN131079,重组蛋白A
·细菌内毒素标准品(10EU/支)
编号:BTN140405
英文名称:Bacterial endotoxin standard
规格:10支
本品常用用作细菌内毒素阳性对照,外观为白色疏松海绵状固体。
储存条件:常温运输,室温阴凉处保存,有效期一年。
内毒素标准溶液的配制:
1. 溶解:取一支标准品,加入细菌内毒素检查用水 1.0mL,复溶后置旋涡混匀器上混匀15分钟,得到溶解即为10EU/mL的内毒素标准品溶液。如果需要其他浓度的内毒素溶液,可根据实验要求配制。
2. 稀释:方法如下(以0.1,0.25,0.5,1.0 EU/mL为例):
取上步配制的10EU/mL的内毒素溶液,稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液,以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1,0.25,0.5,1.0 EU/mL的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。
表1内毒素标准溶液配制
| 内毒素浓度(EU/mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
| 加细菌内毒素检查用水(mL) | 0 | 0.5 | 0.75 | 0.9 |
| 加1EU/ml内毒素溶液(mL) | 1 | 0.5 | 0.25 | 0.1 |
注意事项:
1. 本品为一次性使用。仅供体外鲎实验检测,禁止用于注射、口服等。
2. 实验所用的器皿需经过处理,以除去可能存在的外源性内毒素,可以经250℃干烤至少60分钟处理,也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。实验操作过程中应该防止微生物的污染。
3. 稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟,放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。
北京BTN131079型重组蛋白A促销关键词:Staphylococcal protein A,BTN131079,重组蛋白A
·非变性法蛋白沉淀试剂盒
编号:BTN81029
英文名称:Non-Denaturing Protein Precipitation Kit
规格:10次
本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的非变性蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫*(代"酸")铵加到蛋白质溶液中,夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层),使之“失水”,于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合,使蛋白质形成沉淀,离心分离沉淀后,再用透析方法将蛋白质中的盐除去,即得浓缩的蛋白质。
产品特点:
1.适合于浓缩各种蛋白质粗提液,一次可以处理50mL蛋白质溶液。
2. 非变性法,不会破坏蛋白质的天然结构和活性,尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白质结构稳定,适合于长期保存。
4.可以在透析是进行缓冲液的调换。
5.一站式,带有盐析和透析所需的物品。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml×10 |
| 无菌水 | 50ml |
| EDTA溶液(0.5M) | 0.5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:除对温度敏感的蛋白质样品需在4℃环境下(如冷室)操作外,一般可在室温中操作,操作者整个操作须戴好手套。
盐析沉淀
1.测量待浓缩蛋白质样品的体积,并将其转移到容积至少是样品体积两到三倍的无菌烧杯或玻璃三角瓶中。注意:需要处理的蛋白质样品最好溶解在pH为中性的缓冲液中(如50mM的Tris-HCl),浓度最好在1mg/mL以上。
2.将一个无菌的磁力搅拌子放入三角瓶中,再将三角瓶放置在磁力搅拌器上,打开开关后缓慢搅拌。注意:搅拌过程中不能产生泡沫。
3.如果待浓缩蛋白容易被金属离子失活或抑制,则最好加入EDTA溶液,使其终浓度为10mM,否则此步可省略。
4.根据所需硫*(代"酸")铵的饱和度计算需要加入的溶液A的体积,溶液A的硫*(代"酸")铵饱和度是100%。一般50%的硫*(代"酸")铵饱和度就可以沉淀绝大部分蛋白,超过此饱和度溶液比重很大,难以通过离心收集蛋白质沉淀。
5.小心缓慢加入所需的溶液A(用前需要摇匀)。注意:最好每次少量加入,切莫一下倒入,否则蛋白质容易变性。混合过程中,蛋白质沉淀可能会使溶液呈牛奶状,属于正常现象。
6.将所需溶液A全部加入后,冰上放置60分钟或过夜让蛋白质充分沉淀。
注意:血红蛋白、肌红蛋白和清蛋白等在较高的温度25℃比在0℃度时溶解度低,更容易盐析,所以浓缩这些样品时冰浴放置可以改为室温放置。有的蛋白质15-20分钟就可以完全沉淀,有的则需要数小时。
7.将溶液轻移到旋盖塑料离心管或离心瓶中,在平衡条件下15000×g 4℃离心15分钟。
注意:溶液比重很大,一定要重量上平衡而非体积平衡。
8.小心弃上清,得到蛋白质沉淀。此沉淀可以在4℃放置数月。
9.将尽可能少的无菌水或其他缓冲液加入蛋白质沉淀中使之溶解,所加体积一般是沉淀物体积的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠,可以适当补加无菌水使其变得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置几天。
10.如果溶液中有不溶物(主要是变性的蛋白质),可以15000×g 4℃离心15分钟,留上清。
11.上清液可以用于SDS-PAGE电泳检测或UV法蛋白质浓度测定。
12.如果后续纯化方法是疏水层析或排阻层析,则不需要将溶液中残留的盐去掉,可以直接使用。如果后续纯化是离子交换层析,则需要将溶液中残留的盐去掉,一般采用透析法,具体操作见附一。
附一:透析脱盐
1.将蛋白溶液转移到一端已经封口的透析袋内,预留一些液体膨胀的空间,然后将另一端封口。注意:用户需要预处理透析袋,预处理的方法是将透析袋在含2%(W/V)碳酸**和1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟,用蒸馏水彻底清洗透析袋,然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟并浸没在此溶液中冷却,最后放4℃保存待用。取用时必须要戴手套。
2.将透析袋放置在装有透析液的容器中,透析液的体积必须是蛋白质溶液的20-100倍,溶液最好处于搅拌状态。用户可以用适合后续实验的任何缓冲液作为透析液。每次透析3-4小时,共透析2-3次。可以用自备的*氏试剂检测透析袋外面溶液是否还有残留的铵离子来检测透析是否完成。
3.将透析后的溶液全部转移到离心管中,15000×g 4℃离心15分钟,上清液即为浓缩后的蛋白溶液。可以放-80℃冰箱保存或立即用于后续的实验。
4.如果需要快速测定蛋白质的浓度,可取少许样品作适当倍数稀释后,用紫外分光光计测280nm和260nm的光吸收,再计算其浓度,计算公式为:蛋白浓度(mg/mL)=(1.45×OD280-0.74×OD260)×样品稀释度。
附二:多克隆抗体的浓缩
1.将待处理的血清样品在4℃或室温20000×g离心30分钟,收集上清。
2.取上清20mL与等体积的自备生理盐水混合后,于搅拌下缓慢滴加40mL溶液A。
注:加等量生理盐水的目的是将蛋白质含量降低到2.5-3.0%,否则其他蛋白质会跟抗体一起共沉淀。
3.冰上放置30分钟以上或过夜,使蛋白质充分沉淀。
4.将溶液转移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
5.用12mL自备生理盐水溶解蛋白质沉淀。
6.于搅拌下缓慢滴加8mL溶液A,冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
7.将溶液转移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
8.用13.3mL 生理盐水溶解蛋白质沉淀。
9.于搅拌下缓慢滴加6.6mL溶液A,冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
10.将溶液轻移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
11.用少许生理盐水溶解蛋白质沉淀,并转移到透析袋中。
12.用大于20-100倍体积的PBS 于4℃对蛋白质溶液进行透析,更换透析液数次,然后让蛋白质溶液置-80℃保存或用其他方法进一步纯化。
我公司正在优惠促销蛋白质研究等系列产品,期待您的咨询选购北京BTN131079型重组蛋白A促销。
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文献和实验肝微粒体体外温孵法实验方法描述 肝微粒体体外温孵法是采用肝微粒体,辅以NADPH再生系统,在体外模拟生理环境条件进行代谢反应,经过一定时间的反应后,采用HPLC、HPLC-MC和HPLC-MC/MC测定温孵液中原型药物和其代谢产物,并对代谢产物进行初步的分析和鉴定的方法。 3.1 肝微粒体制备 微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构,是异质性的集合体。它包含内质网膜和核糖体两种基本成分,在体外实验中具有蛋白质合成、蛋白质糖基化和脂类合成
, renaturation 外源基因在大肠杆菌中的高表达常常导致包涵体的形成,虽然包涵体具有富集目标蛋白质、抗蛋白酶、对宿主毒性小等优点,但包涵体蛋白质的复性率一般都很低,而分子伴侣、低分子量添加物等在复性过程中的应用及新的复性方法的建立都大大提高了重组蛋白质复性产率。 一、包涵体: 1.1包涵体的定义、组成与特性: 包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集,形成无活性的固体颗粒。 一般含有50%以上的重组蛋白,其余为核糖体元件、RNA聚合酶、内毒素、外膜蛋白ompC
, small molecules. Key words inclusion body , protein , renaturation 外源基因在大肠杆菌中的高表达常常导致包涵体的形成,虽然包涵体具有富集目标蛋白质、抗蛋白酶、对宿主毒性小等优点,但包涵体蛋白质的复性率一般都很低 , 而分子伴侣、低分子量添加物等在复性过程中的应用及新的复性方法的建立都大大提高了重组蛋白质复性产率。
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