北京全蛋白提取试剂盒(中)现货价格

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北京全蛋白提取试剂盒(中)现货价格的品牌：百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多全蛋白提取试剂盒(中)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：北京全蛋白提取试剂盒(中)现货价格
编号：QN1068
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50T|100T
全蛋白提取试剂盒(中)用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀，放置在冰上备用;
(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5～1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;
(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
(1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml;
(2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min
(3)悬浮细胞：4℃,400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3～4次;
(4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;
(5)将上清移入新的EP管中;
(6)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注意事项：
1、实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境;
2、PSMF(有毒)现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解;

储存条件 ：-20℃

除北京全蛋白提取试剂盒(中)现货价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·5×考马斯亮蓝G-250
编号：QN1071
英文名称：5×G250(Protein quantitative analysis)
规格：100mL|500mL
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置(Imax)，由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。

·组胺
编号：QN0614
英文名称：Histamine
规格：1g
CAS号：51-45-6
分子式：C5H9N3
分子量：111.15
储存条件：-20℃

·L-阿拉伯糖
编号：QN0168
英文名称：Histamine
规格：10g|100g
本品常用于细菌培养;香料合成。，在自然界中L-阿拉伯糖很少以单糖形式存在，通常与其他单糖结合，以杂多糖的形式存在于胶质、半纤维 素、果胶酸、细菌多糖及某些糖苷中。其对热和酸的稳定性高。

别名：L(＋)-树胶醛糖;L(＋)-阿戊糖;树胶醛糖;果胶糖
英文名称：L-(+)-Arabinose;L-Arabinose
CAS号：5328-37-0
分子式：C5H10O5
分子量：150.13
储存条件：室温干燥保存
纯度：≥99%
性状：白色结晶性粉末
熔点：160～163℃
溶解性：溶于水，参考浓度400mg/4ml。


·尿苷-5"-三磷酸三*盐
编号：QN0539
英文名称：Uridine-5"-triphosphoric acid trisodiu*(代"m") salt
规格：250mg
本品为科研实验用P2Y受体激动剂。

别名：尿苷三磷酸三*盐
CAS号：19817-92-6
分子式：C9H12N2Na3O15P3
分子量：550.09
储存条件：−20℃


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·细胞核提取试剂盒
编号：QN1309
英文名称：Nuclear Extraction Kit
规格：50T|100T
细胞核提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的细胞核的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，性能稳定。

操作步骤：
1. 样本处理
a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。
b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 g 离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5 ×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50μL Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5mL离心管中，4℃，700g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀。
3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 离心5min。细胞核沉淀在管底。
4. 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉淀，1000g 离心10min ，弃上清，得到较纯的细胞核沉淀。
5. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
1. 为保证获得完整的细胞核，务必做到：第一，全程低温操作;第二，快速;第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。转速与离心力换算：G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G为离心力，一般以ｇ(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]2即：转速的平方;R为半径，单位为厘米。

储存条件：4℃


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·盐*(代"酸")多巴胺
编号：QN0617
英文名称：Dopamine hydrochloride
规格：5g
本品是一种生化试剂，仅用于科研领域。

别名：3-羟基酷胺盐*(代"酸")盐;3-羟酪胺;多巴胺盐*(代"酸")盐
CAS号：62-31-7
分子式：C8H12ClNO2
分子量：189.64
纯度：＞98%
性状：白色针状结晶或结晶性粉末
储存条件：-20℃

·潮霉素B
编号：QN0023
英文名称：Hygromycin B
规格：1g
本品常用做蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。

CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg

潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法

1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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