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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输和保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Mycobacteria DNA column extraction kit
- 库存:
878
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒厂家,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒厂家
英文名:Mycobacteria DNA column extraction kit
规格:50次
品牌:百奥莱博
编号:BTN70703
产地:国产|进口
分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就有25种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁,快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发。
试剂盒特点:
1. 操作简单,客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR检测灵敏度一般在10-100CFU/mL样品。
3. 既可以使用培养的细菌,也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 化痰液 | 100ml |
| 溶液A | 7.5ml |
| 溶液B | 15ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力,所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待,并严格按有关部门要求进行消毒处理。
一:培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
2. 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g室温离心15分钟,弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
二:含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将需要处理的痰液样品加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
2. 加入等体积的化痰液,充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓,可以延长保温时间。
3. 3000 g室温离心15分钟,弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
三:含分枝杆菌的血液样品的预处理
1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理,具体操作见百奥莱博红细胞裂解液(BTN60403)使用手册。
2. 将得到的白细胞沉淀-20℃或更低温度放置10分钟。
3. 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂,加入自备的TE或PBS缓冲液,直到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀细菌,离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管,则可以12000~15000g室温离心。如果样品在10-15mL离心管,则3000-5000g室温离心。
6. 吸弃上清(含白细胞DNA)后所得细菌沉淀可以放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
四:细菌基因组DNA的提取
1. 将150μl 65℃预热过的溶液A加到有细菌沉淀的离心管中,充分震荡混匀。
2. 将细菌和溶液A的混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管,否则后面处理过程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自备*仿,充分震荡混匀。
4. -20℃放置直到液体凝固,一般需要20-60分钟。过夜放置也可。
5. 放室温融化后振荡半分钟。
6. 12000~15000g室温离心3~5分钟,小心转移上清到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
7. 12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 重复第8步的洗涤过程一次。
10. 短暂离心半分钟。此步不要省略,否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
11. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中,加入30-100μL DNA洗脱液2.0,12000~15000g室温离心半分钟,所得溶液即基因组DNA。
更多有关柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒厂家的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·血清血浆游离RNA提取试剂盒
编号:BTN130978
英文名称:Serum/Plasma RNA column Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从血清/血浆等液体样品中提取游离RNA的产品。
试剂盒特点:
1. 操作简单,整个过程只需要20分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高,通过RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50拷贝/mL。
3. 安全无毒,不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4.与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。
5. 价廉物美,性价比远低于国外同类产品。
6.适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
试剂盒组成:
| 成份 | 编号 | 规格 |
| 溶液A | BTN130978A | 30mL |
| 离心吸附柱(小提) | BTN60911 | 50套 |
| 通用洗柱液 | BTN60408 | 50mL |
| RNA洗脱液 | BTN71207 | 10mL |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL血清/血浆样品。如果样品需要富集,可以将1.5mL液体在4℃下24,000 g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL溶液A,振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意:溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将溶液全部转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
4. 12000~15000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
5. 加入0.8mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
6. 12000~15000g室温离心半分钟。
7.在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μL通用洗脱液,然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中,室温放置2分钟。
8. 12000~15000g室温离心1分钟,离心管中收集的样品即为RNA。
9. RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应,也可放-80℃长期保存。注:游离的RNA一般含量极少,不宜用电泳法检测。
疑难解答
Q:提取血清血浆等液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子,每种RNA有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而PCR或RT-PCR的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。
柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒厂家关键词:BTN70703,柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒,Mycobacteria DNA column extraction kit
·AEBSF溶液(10mg/mL)
编号:BTN130544
英文名称:AEBSF Solution
规格:5mL
本产品为浓度是10mg/mL的AEBSF水溶液,工作浓度为0.1-1.0mg/mL。4-(2-*乙基)*磺酰*盐*(代"酸")盐(4-(2-Aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride hydrochloride,Pefabloc SC),分子量是239.5,溶于水,无毒,在低pH条件下,比PMSF更稳定。它是一种水溶性的不可逆的丝*酸蛋白酶,可以抑制胰凝乳蛋白酶,激肽释放酶,血纤维蛋白溶酶,凝血酶和胰蛋白酶。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期3个月。
·*霉素干粉
编号:BTN60102
英文名称:Chloramphenicol Powder
规格:1g
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5,分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5~151.5℃。在干燥时稳定,在弱酸性和中性溶液中较安定,煮沸也不见分解,遇碱类易失效。
结构式:
储存条件:常温运输、4℃保存、有效期一年。
柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒厂家关键词:BTN70703,柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒,Mycobacteria DNA column extraction kit
BL1125 EDTA抗原修复液(50×)
ARB11074 人软骨糖蛋白39(HC gp-39)elisa测定使用说明书 Human cartilage glycoprotein 39,hc gp-39 ELISA KIT
68-19-9 维生素B12 VitaminB12
PY08-076 磷酸盐缓冲液 9ml 20支/盒 用作稀释液
62625-32-5 *甲*(代"酚")绿
ARB10168 人T细胞受体(TCR)检测服务 Human t cell receptor,tcr ELISA KIT
ARB13722 兔载脂蛋白A1(Apo-A1)酶免分析 Rabbit apoprotein a1,apo-a1 ELISA KIT
丝*醇 Gum sandarac 534-03-2
ARB11218 人细胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)ELISA检测服务 Human cytokeRatin 18-m30,ck 18-m30 ELISA KIT
ARB13650 兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)代做ELISA实验 Rabbit basic fibroblast growth factor,bfgf ELISA KIT
ARB12449 大鼠*调素(CAM)elisa检测操作说明书 Rat calmodulin,cam ELISA KIT
ARB10014 人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)含量分析 Human 2,3-disphosphoglyceRate,2,3-dpg ELISA KIT
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文献和实验酶切,切完一个纯化后再切:温度要求不同,先酶切低温要求的,再酶切高温要求的;若盐浓度要求不同,先酶切低盐浓度要求的,再酶切高盐浓度要求的。5、 若质粒是在TE中保存的,TE 中的EDTA可能与酶的激活因子螯合,影响酶切效果,可放大酶切体积或重新浓缩质粒。6、 限制酶的选择非常重要,尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。7、 纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,推荐柱式
6、 限制酶的选择非常重要,尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。 7、 纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。
的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。7、纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。8、酶量的问题:以TAKARA的为例,其对1单位酶的定义如下:在50 μl 反应液中,30℃温度下反应1小时,将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义
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