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- E00898
- 国内
- 2025年11月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
瓦兰生物
- 检测范围：
不限
- 检测方法：
酶联免疫法
- 应用：
科研单位
- 适应物种：
不限
- 标记物：
HDV Ag
- 样本：
液体
- 库存：
大量
- 规格：
96T
丁肝抗原(HDV Ag) ELISA试剂盒
丁型肝炎病毒抗原（HDV Ag）ELISA试剂盒的实验操作步骤通常包括样品准备、试剂添加、孵育、洗涤、底物反应和结果读取等。以下是一般的操作流程，具体操作应根据所使用的试剂盒说明书进行调整：
丁肝抗原（HDV Ag）ELISA试剂盒实验操作步骤
1. 准备工作
- **实验室准备**：确保实验室环境符合生物安全要求，准备好所需的仪器设备（如酶标仪、洗板机等）。
- **试剂盒检查**：从试剂盒中取出所有组件，确保试剂在有效期内并且储存条件符合要求。
2. 样品准备
- **样品类型**：通常为血清或血浆样品。
- **样品处理**：收集样品后，离心以去除细胞成分，取上清液进行测试。
3. 试剂准备
- **标准品和稀释液**：根据说明书配置标准品和稀释液，通常需要将标准品稀释成不同浓度的标准曲线。
4. 加样
- **涂板**：将样品、标准品和空白对照分别加入到ELISA板的孔中，通常每个样品至少做三次平行重复。
- **加入试剂**：根据试剂盒说明，加入检测抗体（如酶标记的二抗）。
5. 孵育
- **温度和时间**：按照说明书要求，在适宜的温度下（如37°C）孵育一定时间（通常为1-2小时或过夜）。
6. 洗涤
- **洗板**：使用洗板机或手动洗涤，按照说明书要求进行多次洗涤，以去除未结合的抗体。
7. 加入底物
- **底物反应**：加入底物溶液（如TMB底物），在适宜的条件下孵育（通常为15-30分钟），以使酶催化反应产生显色。
8. 停止反应
- **停止液**：加入停止液（如1M硫酸），停止反应并使颜色稳定。
9. 结果读取
- **测定吸光度**：使用酶标仪在适当波长（如450 nm）下读取各孔的吸光度值。
10. 数据分析
- **绘制标准曲线**：根据标准品的浓度和对应的吸光度值绘制标准曲线。
- **计算结果**：根据样品的吸光度值和标准曲线计算样品中HDV抗原的浓度。
注意事项
- 操作过程中应佩戴适当的个人防护装备（如手套、口罩等）。
- 确保所有试剂和样品在操作前充分混匀。
- 严格按照试剂盒说明书进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。以上步骤为一般的丁肝抗原ELISA实验流程，具体细节可能因试剂盒品牌和型号而有所不同，建议在实验前仔细阅读和遵循试剂盒的说明书，以确保实验的成功和结果的可靠性。
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注：标准品浓度依次为：20、10、5、2.5、1.25、0 ng/mL.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
- 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
- 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
- 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
- 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
- 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6个月
免责声明
- 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles
Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: The samples should be centrifugated adequately and no hemolysis or granule was allowed.
Materials required but not supplied
1. Standard microplate reader(450nm)
2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.
3. 37 ℃ incubator
Precautions
1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.
2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.
3. Mix all reagents before using.
Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)
Materials supplied
| Name | 96 determinations | 48 determinations |
| Microelisa stripplate | 12*8strips | 12*4strips |
| Standard | 0.3ml | 0.3ml |
| Sample diluent | 6.0ml | 3.0ml |
| HRP-Conjugate reagent | 10.0ml | 5.0ml |
| 20X Wash solution | 25ml | 15ml |
| Chromogen Solution A | 6.0ml | 3.0ml |
| Chromogen Solution B | 6.0ml | 3.0ml |
| Stop Solution | 6.0ml | 3.0ml |
| Closure plate membrane | 2 | 2 |
| User manual | 1 | 1 |
| Sealed bags | 1 | 1 |
8、4、2、1、0.5、0 ng/ml.
Reagent preparation
20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.
Assay procedure
1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3. Add Sample: Add testing sample 10μl Then add sample diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.
4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C.
5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.
7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
Calculation of results
- This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.
- First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.
- To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.
- Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.
- The sensitivity by this assay is 0.1 ng/ml.
- Standard curve
Storage： 2-8℃.
validity： six months.
FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
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