Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销*(代"售")，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销*(代"售")
编号：BTN130648
规格：200U
英文名：Afu Uracil-DNA Glycosylase
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶(Afu UDG)是E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)热稳定的同源蛋白，来源于闪烁古生球菌。该酶从含尿嘧啶的DNA上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单链DNA上的尿嘧啶。其反应示意图如下：


产品特点：
1．热稳定；
2．从双链或单链DNA上切下尿嘧啶。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指每分钟从含尿嘧啶双链DNA上催化释放60pmol尿嘧啶所需要的酶量。

Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销*(代"售")极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·5´RACE试剂盒
编号：BTN101105
英文名称：5´-RACE Kit
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。


Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销*(代"售")关键词：Afu Uracil-DNA Glycosylase,Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶,BTN130648


·DMSO，PCR级
编号：BTN80205
英文名称：DMSO，PCR Grade
规格：1.5mL
大量实验显示5-10%的DMSO能够促进PCR反应，尤其是高GC模板的PCR反应，本产品就是专门用于PCR或RT-PCR的高纯度DMSO。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

·包涵体微量纯化试剂盒
编号：BTN90508
英文名称：Inclusion Body Miniprep Kit
规格：20次
包涵体是指超表达的蛋白在细胞胞浆内(如果超表达的是胞浆蛋白)或膜间内(如果超表达的是分泌蛋白)凝集形成的无活性的固体颗粒。包涵体形成的主要原因是在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白折叠辅助因子，或环境不适导致无法形成正确的蛋白质次级键。由于包涵体主要由超表达的重组蛋白质组成，因此分离纯化包涵体是分离纯化具有活性的重组蛋白的第一步。本产品就是用于快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．操作简单快速，整个过程只要三十分钟左右。
2．微量纯化，可以在1.5mL离心管中完成。
3．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
4．A型用于超声法裂菌，B型用于酶法裂菌。
5．可以选择盐*(代"酸")胍和尿素两种蛋白溶解方式。
6．得到的包涵体溶解液可以用于重折叠、SDS-PAGE或其他纯化处理。

试剂盒组成：

成分	20T(A型)	20T(B型)
溶液A	5ml	5ml
溶液B	50ml	50ml
包涵体溶解液	5ml	5ml
尿素	5g	5g
溶菌酶	无	600mg
Benzonase(1U/μL)	无	20μl

储存条件：常温运输和保存(B型的溶菌酶和Benzonase 需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、超声法裂菌(只适用于A型)
1．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。最好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
2．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。沉淀(约10mg)放冰上待用或放-80℃保存。
3．加入250μL 冰浴的溶液A，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则不容易沉淀包涵体。
4．直接进入第14步。

二、酶法裂菌(只适用于B型)
5．将600mg 溶菌酶全部加入到5mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次微量提取需要250μl)分成小份放-20℃待用。每次只取用一管。
6．包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。
7．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。最好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
8．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。
9．加入250μL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
10．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
11．-20℃冷冻至凝固，一定要凝固到细菌溶液变成固体为止。
12．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA 将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复冻融步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
13．加入1μL Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右，否则还需要延长保温时间。
14．12000rpm 4℃离心5分钟，留存上清作为SDS-PAGE 对照样品一。
15．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
16．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品二。
17．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
18．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品三。本产品提供的溶液B足够两次洗涤(两次洗涤一般可得到足够纯净的包涵体)。如果需要更多洗涤，用户需要单独购买包涵体洗涤液(溶液B)
19．沉淀为纯化的包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接用于包涵体溶解。

三、包涵体的溶解：
20.在包涵体沉淀中加入250μL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡室温放置1小时使蛋白质充分溶解。注意：包涵体溶解液含6M 盐*(代"酸")胍，溶解蛋白能力强于含8M尿素的溶解液，但SDS-PAGE时不能直接上样。客户也可以用本试剂盒提供的尿素干粉自配8-10 M 尿素的溶液(尿素溶液不稳定，所以不能长期放置)溶解包涵体，得到的溶解液可以直接用于SDS-PAGE或后续纯化。但其溶解能力弱于盐*(代"酸")胍。
21. 20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀(未能溶解的包涵体)。SDS-PAGE 检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
22. 所得蛋白质溶液可以用于复性等试验。用户可本公司购买包涵体复性套装。


Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶销*(代"售")关键词：Afu Uracil-DNA Glycosylase,Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶,BTN130648

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