β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒库存，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒库存
产地：国产|进口
英文名：β-galactosidase Assay Kit
品牌：百奥莱博
编号：BTN130599
本产品是分光光度法测定β-GAL活力的，测定原理为β-GAL分解对-硝基*(代"*")-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基*(代"*")酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酶提取液	50ml
溶液A	粉剂1瓶
溶液B	15ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存，其中试剂A需-20℃保存，有效期半年。

使用方法：
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

一、酶液提取
1．细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：酶提取液体积(mL)为500～1000：1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL酶提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200 W，超声3秒，间隔10秒，重复30次)；15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2．组织：按照组织质量(g)：酶提取液体积(mL)为1：5～10的比例(建议称取约0.1 g组织，加入1mL酶提取液)，进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、 测定操作步骤
1．分光光度计预热30分钟以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2．取出试剂A，临用前向试剂瓶中加入5mL蒸馏水，充分溶解备用，制备成溶液A工作液(用不完的溶液A仍需-20℃保存)。
3．样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)：

试剂名称	对照管(μl)	测定管(μl)
样本	50	50
蒸馏水	200	0
溶液A工作液	0	200
溶液B	250	250
迅速混匀，放入37℃准确水浴30分钟
溶液C	1000	1000
充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

三、酶活性计算公式
标准条件下测定的回归方程为y=0.00543x -0.0027；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
注：V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反应中样本体积，0.05mL；V样总：加入酶提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30分钟。
1．按照样本蛋白浓度计算：
 酶活性定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷Cpr
 如果需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2．按照样本鲜重计算：
 酶活性定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷W
3．按细菌或细胞密度计算：
 酶活性定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基*(代"*")酚定义为一个酶活力单位。
 β-GAL活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)

关于β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒库存的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·还原剂兼容型BCA蛋白定量试剂盒
编号：BTN131069
英文名称：Reductant-Comp*(代"a")tible BCA Kit
规格：250次
本产品是用于含有还原剂的蛋白溶液定量的专用产品。

产品特点：
1．与5mM DTT，35mM巯基乙醇或10mM TCEP兼容。
2．无需蛋白沉淀。
3．线性工作范围：125-2000微克/毫升。
4．样品体积：25微升。
5．与多数离子型或非离子型去污剂兼容。
6．比基于考马斯(Bradford)测定方法的蛋白间差异更少。
7．比色法，在562纳米除读数。
8．使用方便。

试剂盒组成：

成份	规格
BCA试剂A	250mL
BCA试剂B	25mL
兼容试剂	10×20mg
重溶缓冲液	15mL
白蛋白标准品(2mg/ml)	10×1mL安瓿
用于BCA-RAC分析的96孔板	5块
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存、有效期两年(但BSA标准需要-20℃保存)。


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·柱式植物RNA大量提取试剂盒
编号：BTN80903
英文名称：Plant RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)的大提升级产品，它结合了植物RNA提取试剂盒的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNA提取试剂盒产品介绍的附录)和柱式纯化系列产品的快捷性。

试剂盒特点：
1.样品处理量大，一次可以处理5g的植物材料。
2. 操作简单快速，处理一个样品只需要约二十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4.产量高(具体根据材料不同而不同)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	30ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物叶片、或1-3g植物种子、或5-10g植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入50mL塑料离心管中，加入20mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，但为避免氧化，砚磨时必须将组织浸泡在溶液A中进行，不能只在液氮中砚磨，然后再将砚磨物转移至干净的50mL塑料离心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.在离心管中加入5mL的溶液B和5mL自备*仿，在振荡器上充分振荡1-3分钟，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，水相和有机相之间将有较厚的细胞破碎物。
5. 将上清液转移到另一干净的50mL塑料离心管中。下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下少量上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
9. 加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
10. 重复上步一次，加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
11.室温离心1-3分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将大提离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free 收集管中，加入0.5mLRNA 洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
14. 再加入0.5mL RNA 洗脱液，重复上面两步一次。
15. 将两次洗脱得到的RNA 立即使用或存放于-80℃待用
16. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
17. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
18. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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