动物线粒体纯化试剂盒B(精提)优惠促销

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名称：动物线粒体纯化试剂盒B(精提)优惠促销
编号：BTN111207B
产地：国产|进口
规格：5次
英文名：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

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L-丙交酯 Ferric citrate 4511-42-6
SJ0335 HT(原装)
F040304 山羊IgG抗原 Goat IgG
ARB13141 小鼠总补体(CH50)elisa检测 Mouse 50% complement hemolysis,ch50 ELISA KIT
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3-吲哚丁酸* Levamisole hydrochloride 60096-23-3
NF-247 冻干羊抗人C3C血清
SJ0505 Procyanidin 原花青素
阿拉伯树胶粉 1-Aminocyclopropanecarboxylic acid 9000-01-5
ARB12670 大鼠雌二醇(E2)Elisa定量检测 Rat estradiol,e2 ELISA KIT
DP348 血液基因组DNA提取试剂盒
BL1442 X-gal(20mg/ml)
ARB11271 人骨保护素(OPG)血清中含量检测 Human osteoprotegerin,opg ELISA KIT
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DL-谷*酰胺 1,4-Dihydroxyanthraquinone 6899-04-3
1119-34-2 L-Arginine  HCL  L-精*酸盐*(代"酸")盐
ARB10029 人8异构前列腺素F2α(8-epI-PGF2α)酶标法分析 Human 8-epi-prostaglandin f2alpha,8-epi-pgf2α ELISA KIT
BTN120699 多粘菌素B硫*(代"酸")盐 Polymyxin B Sulfate Solution
胶原酶 Sephadex G-10 9001-12-1
F010110 小鼠抗三聚"青"胺抗体 Monoclonal Mouse Anti-Melamine
双甘*肽 HSTU 556-50-3
ARB11046 人表皮生长因子(EGF)Elisa定量检测 Human epidermal growth factor,egf ELISA KIT
ARB10769 人抗SA抗体(Anti-SA-Ab)ELISA代测服务 Human anti-sa-antibody ELISA KIT
HC0288 Biohit单道可调整支灭菌移液器系列
PL1201 高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)
硫*(代"磺")素S Ammonium alcohol polyvinyl phosphate 1326-12-1
ARB10984 人角化细胞生长因子(KGF)酶免分析 Human keRatinocyte growth factor,kgf ELISA KIT
BTN80805 柱式毛发DNAOUT Column Hair DNAOUT
ARB14127 人脂肪酸合酶(FASN)ELISA检测服务 
ARB14079 大鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)酶免分析 
CYB165010 HRP标记生物素
F030241 HRP标记小鼠抗鸡IgY(IgG)抗体 HRP*Monoclonal Mouse Anti-Chicken IgY
ARB13473 鸡补体3裂解产物(C3SP)含量检测 Chicken complement 3 split product,c3sp ELISA KIT
BL1093 DMEM(高)(H)(不含酚红、谷*酰胺、丙*(代"酮")酸*)
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·柱式植物RNA大量提取试剂盒
编号：BTN80903
英文名称：Plant RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)的大提升级产品，它结合了植物RNA提取试剂盒的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNA提取试剂盒产品介绍的附录)和柱式纯化系列产品的快捷性。

试剂盒特点：
1.样品处理量大，一次可以处理5g的植物材料。
2. 操作简单快速，处理一个样品只需要约二十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4.产量高(具体根据材料不同而不同)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	30ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物叶片、或1-3g植物种子、或5-10g植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入50mL塑料离心管中，加入20mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，但为避免氧化，砚磨时必须将组织浸泡在溶液A中进行，不能只在液氮中砚磨，然后再将砚磨物转移至干净的50mL塑料离心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.在离心管中加入5mL的溶液B和5mL自备*仿，在振荡器上充分振荡1-3分钟，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，水相和有机相之间将有较厚的细胞破碎物。
5. 将上清液转移到另一干净的50mL塑料离心管中。下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下少量上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
9. 加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
10. 重复上步一次，加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
11.室温离心1-3分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将大提离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free 收集管中，加入0.5mLRNA 洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
14. 再加入0.5mL RNA 洗脱液，重复上面两步一次。
15. 将两次洗脱得到的RNA 立即使用或存放于-80℃待用
16. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
17. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
18. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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