dTTP溶液，2.5mM销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")dTTP溶液，2.5mM销*(代"售")，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：dTTP溶液，2.5mM销*(代"售")
英文名：dTTP Solution，2.5mM
规格：2mL
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN130913
dTTP分子式为C10H14N2O14P3Na3,分子量是548.1，消光系数为：9.6×103M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为267nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

dTTP溶液，2.5mM销*(代"售")正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·OPD干粉
编号：BTN131115
英文名称：o-phenylenediamine dihydrochloride
规格：25g
OPD和HRP反应时生成水溶性橙黄色产物，在492nm时有最大吸收峰。

储存条件：常温运输，避光保存，有效期一年。

·K562 DNA
编号：BTN131035
英文名称：Human Culture Cell Genomic DNA
规格：30μg
K562 DNA是从人慢性粒细胞白血病细胞系继代培养的细胞中纯化得到的，作为一个对照用于单位点探针分析方法中的多数步骤。该DNA 也可作为参照用于适当的酶切消化后可变数目串联重复序列(VNTR)等位基因片段大小的确定。由于实验室在操作方案和分析方法上的不同，得到的K562片段大小可能会有细微差别，本产品浓度为0.4–1.0μg/μL。

储存条件：低温运输、4℃保存、避免反复冻融，有效期一年。

·鲱鱼精DNA溶液
编号：BTN130908
英文名称：Herring Sperm DNA Solution
规格：1mL
本产品是浓度为10mg/mL的、经过热变性处理的单链鲱鱼精DNA溶液可以用于Southern、Northern预杂交，还可以用于酵母化学转化和电转化。本产品即开即用，非常方便。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·SP6体外转录试剂盒
编号：BTN91107
英文名称：SP6 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有SP6启动子的模版DNA，以NTP为底物，从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上，转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有SP6启动子的载体，并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμL	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50 ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
SP6转录预配液(2×)	10μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA？需加入带帽NTP类似物即可，本公司提供5种供选择。


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·尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)
编号：BTN130647
英文名称：Uracil Glycosylase Inhibitor
规格：200U
尿嘧啶-DNA糖基化酶抑制剂(UGI)分子量为9.5kDa,可以抑制大肠杆菌和其他物种的尿嘧啶-DNA糖基化酶。UGI和UDG以1:1的比例可逆结合。UGI可以分离UDG-DNA复合物。

产品组成：

成份	规格
UDI(2000U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·生物素化的β-半乳糖苷酶
编号：BTN131097
英文名称：Biotin-β-Galctosidase
规格：100U
本产品为生物素标记的β-半乳糖苷酶，在免疫组化和免疫印迹应用中与ONPG一起使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性单位定义：一个单位等于每分钟在37℃，pH7.3时水解1μmol ONPG。


dTTP溶液，2.5mM销*(代"售")关键词：BTN130913,dTTP溶液，2.5mM,dTTP Solution，2.5mM

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