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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
Rat tail DNA column extraction kit
- 库存:
658
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式鼠尾DNA提取试剂盒厂家价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:柱式鼠尾DNA提取试剂盒厂家价格
品牌:百奥莱博
英文名:Rat tail DNA column extraction kit
产地:国产|进口
大鼠和小鼠是重要的生命科学实验材料,鼠尾则是小鼠最佳活体样品,常用于基因型的快速检测。本试剂盒采用独特的酶和缓冲体系,可以快速得高质量、高纯度的基因组DNA。
产品特点:
1. 即开即用,不需要自己准备各种溶液。
2. 简单快速,最快可在60分钟内从0.5 鼠尾中提取到10μg DNA。
3. 柱式法回收,所得DNA 纯度高(OD260/280一般在1.7-1.9)。片段大(一般在20 kb以上)、纯度高。
4. 安全环保:无需有机试剂抽提。
5.可用于后续的酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
6. 除鼠尾外,还可用于其他动物组织(心,肝、肾、脾和肌肉等)。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 蛋白酶K溶液(10mg/mL) | 1ml |
| 溶液B | 15ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱(15层膜) | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输,-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 剪取0.5-1cm鼠尾(约15-30mg),尽量剪短成的1mm左右小段,放入干净的1.5mL塑料离心管中。若不需要立即使用,可以在液氮中或-80℃长期放置,或-80℃放置数天。如果是动物心,肝、肾、脾和肌肉等组织,则取30mg左右并充分剪碎。
2. 加入1mL溶液A和20μl蛋白酶K溶液(10mg/mL),37℃保温10小时(一般过夜保温就可以)。也可以放置于65℃金属浴或水浴中保温2小时,其间每间隔10分钟涡旋混匀一次(或用手指用力弹击离心管底部数次)以帮助鼠尾酶解。对于老年小鼠鼠尾,可以适当增加酶解时间到3-4小时。如果有温控混合器使反应体系始终处于摇晃状态,则效果更佳。
3. 加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备*仿,振荡器上振荡30秒充分混匀。
4. 12000rpm室温离心3分钟,小心将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的溶液C,上下颠倒30秒充分混匀。
6. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8mL混合液转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000rpm室温1分钟,弃穿透液。再把剩余的一半上柱,重复此操作。
7. 将0.7mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 将0.3mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,12000rpm离心半分钟(此步为第二次洗涤,一般可以省略)。
9. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
10. 将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μl DNA 洗脱液2.0。
11. 12000rpm离心1分钟,管底即为DNA溶液,可立即用于PCR,也可长期保存在-20℃。
关于柱式鼠尾DNA提取试剂盒厂家价格的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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丙*(代"烯")葡聚糖凝胶S-100 HR MU-α-Gal 65546-95-4
柱式鼠尾DNA提取试剂盒厂家价格关键词:Rat tail DNA column extraction kit,柱式鼠尾DNA提取试剂盒,BTN121102
·非变性法蛋白沉淀试剂盒
编号:BTN81029
英文名称:Non-Denaturing Protein Precipitation Kit
规格:10次
本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的非变性蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫*(代"酸")铵加到蛋白质溶液中,夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层),使之“失水”,于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合,使蛋白质形成沉淀,离心分离沉淀后,再用透析方法将蛋白质中的盐除去,即得浓缩的蛋白质。
产品特点:
1.适合于浓缩各种蛋白质粗提液,一次可以处理50mL蛋白质溶液。
2. 非变性法,不会破坏蛋白质的天然结构和活性,尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白质结构稳定,适合于长期保存。
4.可以在透析是进行缓冲液的调换。
5.一站式,带有盐析和透析所需的物品。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml×10 |
| 无菌水 | 50ml |
| EDTA溶液(0.5M) | 0.5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:除对温度敏感的蛋白质样品需在4℃环境下(如冷室)操作外,一般可在室温中操作,操作者整个操作须戴好手套。
盐析沉淀
1.测量待浓缩蛋白质样品的体积,并将其转移到容积至少是样品体积两到三倍的无菌烧杯或玻璃三角瓶中。注意:需要处理的蛋白质样品最好溶解在pH为中性的缓冲液中(如50mM的Tris-HCl),浓度最好在1mg/mL以上。
2.将一个无菌的磁力搅拌子放入三角瓶中,再将三角瓶放置在磁力搅拌器上,打开开关后缓慢搅拌。注意:搅拌过程中不能产生泡沫。
3.如果待浓缩蛋白容易被金属离子失活或抑制,则最好加入EDTA溶液,使其终浓度为10mM,否则此步可省略。
4.根据所需硫*(代"酸")铵的饱和度计算需要加入的溶液A的体积,溶液A的硫*(代"酸")铵饱和度是100%。一般50%的硫*(代"酸")铵饱和度就可以沉淀绝大部分蛋白,超过此饱和度溶液比重很大,难以通过离心收集蛋白质沉淀。
5.小心缓慢加入所需的溶液A(用前需要摇匀)。注意:最好每次少量加入,切莫一下倒入,否则蛋白质容易变性。混合过程中,蛋白质沉淀可能会使溶液呈牛奶状,属于正常现象。
6.将所需溶液A全部加入后,冰上放置60分钟或过夜让蛋白质充分沉淀。
注意:血红蛋白、肌红蛋白和清蛋白等在较高的温度25℃比在0℃度时溶解度低,更容易盐析,所以浓缩这些样品时冰浴放置可以改为室温放置。有的蛋白质15-20分钟就可以完全沉淀,有的则需要数小时。
7.将溶液轻移到旋盖塑料离心管或离心瓶中,在平衡条件下15000×g 4℃离心15分钟。
注意:溶液比重很大,一定要重量上平衡而非体积平衡。
8.小心弃上清,得到蛋白质沉淀。此沉淀可以在4℃放置数月。
9.将尽可能少的无菌水或其他缓冲液加入蛋白质沉淀中使之溶解,所加体积一般是沉淀物体积的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠,可以适当补加无菌水使其变得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置几天。
10.如果溶液中有不溶物(主要是变性的蛋白质),可以15000×g 4℃离心15分钟,留上清。
11.上清液可以用于SDS-PAGE电泳检测或UV法蛋白质浓度测定。
12.如果后续纯化方法是疏水层析或排阻层析,则不需要将溶液中残留的盐去掉,可以直接使用。如果后续纯化是离子交换层析,则需要将溶液中残留的盐去掉,一般采用透析法,具体操作见附一。
附一:透析脱盐
1.将蛋白溶液转移到一端已经封口的透析袋内,预留一些液体膨胀的空间,然后将另一端封口。注意:用户需要预处理透析袋,预处理的方法是将透析袋在含2%(W/V)碳酸**和1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟,用蒸馏水彻底清洗透析袋,然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟并浸没在此溶液中冷却,最后放4℃保存待用。取用时必须要戴手套。
2.将透析袋放置在装有透析液的容器中,透析液的体积必须是蛋白质溶液的20-100倍,溶液最好处于搅拌状态。用户可以用适合后续实验的任何缓冲液作为透析液。每次透析3-4小时,共透析2-3次。可以用自备的*氏试剂检测透析袋外面溶液是否还有残留的铵离子来检测透析是否完成。
3.将透析后的溶液全部转移到离心管中,15000×g 4℃离心15分钟,上清液即为浓缩后的蛋白溶液。可以放-80℃冰箱保存或立即用于后续的实验。
4.如果需要快速测定蛋白质的浓度,可取少许样品作适当倍数稀释后,用紫外分光光计测280nm和260nm的光吸收,再计算其浓度,计算公式为:蛋白浓度(mg/mL)=(1.45×OD280-0.74×OD260)×样品稀释度。
附二:多克隆抗体的浓缩
1.将待处理的血清样品在4℃或室温20000×g离心30分钟,收集上清。
2.取上清20mL与等体积的自备生理盐水混合后,于搅拌下缓慢滴加40mL溶液A。
注:加等量生理盐水的目的是将蛋白质含量降低到2.5-3.0%,否则其他蛋白质会跟抗体一起共沉淀。
3.冰上放置30分钟以上或过夜,使蛋白质充分沉淀。
4.将溶液转移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
5.用12mL自备生理盐水溶解蛋白质沉淀。
6.于搅拌下缓慢滴加8mL溶液A,冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
7.将溶液转移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
8.用13.3mL 生理盐水溶解蛋白质沉淀。
9.于搅拌下缓慢滴加6.6mL溶液A,冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
10.将溶液轻移到旋盖塑料离心管中,15000×g 4℃离心10分钟,弃上清。
11.用少许生理盐水溶解蛋白质沉淀,并转移到透析袋中。
12.用大于20-100倍体积的PBS 于4℃对蛋白质溶液进行透析,更换透析液数次,然后让蛋白质溶液置-80℃保存或用其他方法进一步纯化。
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柱式鼠尾DNA提取试剂盒厂家价格
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